O papel da fosfolipase d2 na glicosilacao e no trafego de glicoproteinas na via secretora de mastocitos

• Processo: 09/52768-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Constance Oliver
• Beneficiário: Claudia Maria Meirelles Marchini
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Mastócitos Glicoproteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acucares Modificados | Aparelho De Golgi | Celulas Rbl-2H3 | Fosfolipase D2 | Glicoproteinas | Mastocitos

Resumo

A fosfolipase D (PLD) hidrolisa a fosfatidilcolina em ácido fosfatídico (PA) e colina, está envolvida em diversos processos celulares. Esta enzima possui duas isoformas a PLDl e a PLD2 que atuam na secreção da linhagem de mastócitos de rato RBL-2H3. Porém, nestas células as duas isoformas de PLD estão expressas em baixas concentrações, o que levou ao estabelecimento de linhagens que super expressam a enzima PLDl ou PLD2 em sua forma catalítica ativa (PLD1CA e PLD2CA) e na forma catalítica inativa (PLD1CI e PLD2CI). e distribuição do aparelho de Golgi. Estas modificações no aparelho de Golgi podem afetar o processo de glicosilação de proteínas resultando em alterações na via biossintética e na (cinética do trânsito destas glicoproteínas. No presente trabalho serão investigadas as possíveis alterações na síntese de carboidratos específicos entre as linhagens PLD2CA e PLD2CI em comparação com as células RBL-2H3. Para tal, será realizada nas células a incorporação metabólica de açúcares modificados (N-acetilglicosamina e de N-acetilmanosamina) com uma etiqueta azida. Estes açúcares serão utilizados na investigação por microscopia confocal, ilotting e espectrometria de massa para identificar e caracterizar a dinâmica da síntese das glicoproteínas na via secretora. Para confirmar a participação da PLD nos processos de glicosilação a expressão de PLD2 de células RBL-2H3 será silenciada com a técnica de siRNA. A identificação do papel da PLD2 na glicosilação de proteínas possibilitará a descoberta de novos alvos terapêuticos para processos alérgicos e inflamatórios. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MEIRELLES MARCHINI-ALVES, CLAUDIA MARIA; BARBOSA LORENZI, VALERIA CINTRA; MARCELINO DA SILVA, ELAINE ZAYAS; MAZUCATO, VIVIAN MARINO; JAMUR, MARIA CELIA; OLIVER, CONSTANCE. Phospholipase D2 Modulates the Secretory Pathway in RBL-2H3 Mast Cells. PLoS One, v. 10, n. 10, OCT 22 2015. (09/52768-4)