Estudo da presença de RNAs não-codificadores contendo o motivo are de união à proteína HuR em frações de RNA total imunoprecipitadas a partir de células renais normais e tumorais com um anticorpo Anti-HuR

• Processo: 10/18158-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Sergio Verjovski Almeida
• Beneficiário: Felipe Franco de Melo Bagatelli
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 07/59168-7 - Caracterização funcional de RNAs intrônicos não-codificadores expressos no genoma humano, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias Expressão gênica RNAs não codificadores Regulação da expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | expressão | ncRNA | Expressão Gênica

Resumo

Proteínas de união a RNA (RBP) apresentam importante papel na determinação da estabilidade e destino dos transcritos. Dentre os diversos motivos de ligação a RBP presentes nas sequências de RNA, verificam-se os elementos denominados AREs (elementos ricos em AU). HuR, proteína da família ELAV (altamente conservada em vertebrados), ligando-se seletivamente a AREs (presentes na porção 3'-UTR) estabiliza os mRNAs portadores de tal elemento. Este trabalho pretende verificar a presença de RNAs não codificadores (ncRNA) contendo motivo ARE em frações de RNA total imunoprecipitadas a partir de células renais normais e tumorais com anticorpo anti-HuR. Inicialmente, a utilização de anticorpo monoclonal anti-HuR permitirá a imunoprecipitação de proteínas e RNAs complexados a HuR. Através da realização de RT-PCR, os ncRNAs da fração imunoprecipitada poderão ser detectados. Para esta etapa, serão utilizados primers específicos para cada ncRNA selecionado previamente por análise computacional funcional. Os ncRNAs selecionados, além da presença do motivo ARE, apresentam potencial de alteração do processamento do transcrito codificador alvo, da função realizada pelo transcrito codificador, com possível envolvimento do transcrito codificador em carcinomas. Posteriormente, a identificação da orientação dos ncRNAs detectados no imunoprecipitado será feita através da realização de PCR com uso de primers com orientação conhecida (senso e antissenso). Isto permitirá determinar, para cada ncRNA identificado, se o transcrito está presente na amostra com moléculas em ambos os sentidos ou em apenas um deles. Será então realizada a comparação dos níveis de expressão dos ncRNAs identificados entre células renais normais e tumorais através da realização de PCR quantitativo em tempo real. Pretende-se deste modo avaliar a presença de ncRNAs estabilizados por HuR, sugerindo-se assim seu papel na regulação da expressão gênica da célula normal e seu possível envolvimento no processo oncogênico.