Estudo do sistema renina-angiotensina no remodelamento vascular

• Processo: 08/04227-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Silvia Lacchini
• Beneficiário: Cintia Taniguti Lima
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/50200-0 - Estudo das propriedades pro-inflamatorias do sistema renina-angiotensina na fisiopatologia vascular., AP.R
• Assunto(s): Sistema renina-angiotensina Angiotensina II Matriz extracelular Marcadores inflamatórios Moléculas de adesão celular Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: angiotensina II | marcadores ínflamatórios | matriz extracelular | Moléculas de adesão | receptores AT1 e AT2 | remodelamento vascular | Cardiovascular

Resumo

O presente plano de trabalho tem por objetivos: 1) avaliar a ação da Angiotensina II (Ang II) no remodelamento da matriz extracelular (MEC); 2) avaliar a expressão de marcadores iniciais de inflamação em resposta à ação da AngII. Para responder a estes objetivos, serão feitos estudos in vivo em camundongos isogênicos C57Bl/6J tratados ou não com Ang II. Estes estudos focarão a avaliação da ação da Ang II sobre o remodelamento vascular e alteração de componentes da MEC, referente ao Estudo 1, e a avaliação da expressão de marcadores inflamatórios por ação da AngII, referente ao estudo 2. O estudo 1 será executado para a avaliação da resposta da MEC, onde os animais serão tratados durante 7, 14 e 28 dias com doses sub-pressoras de angiotensina II, bloqueador do receptor AT1 (Losartan), bloqueador do receptor AT2 (PD123319) e uma combinação destes. Após este período, os animais serão sacrificados e se procederá a coleta de artérias aorta, carótida e femoral, coração, rins e pulmão para análise da síntese e degradação de componentes da MEC. Serão feitas avaliações hemodinâmicas, morfológicas em microscopia de luz, imunohistoquímica (IHQ) para os componentes da matriz extracelular como colágenos, fibronectina e metaloproteinases de matriz (MMPs 2 e 9). Já o estudo 2 será executado para a avaliação da liberação de marcadores inflamatórios, onde será preparada uma curva de tempo resposta à Ang II subpressora. Para tal, será feita injeção intraperitoneal de Angiotensina II em dose sub-pressora, e a coleta do material ocorrerá nos tempos de 0,5, 1, 2, 6, 12, 24 e 48 horas, quando os animais serão sacrificados. Serão coletados: artérias aorta e carótida, coração, rins e pulmão. Serão feitas avaliações morfométricas para avaliar possível edema tecidual. A avaliação dos marcadores inflamatórios será feita por IHQ, para citocinas, moléculas de adesão e infiltrado inflamatório. Além disso, será feita coleta de sangue para a dosagem de marcadores inflamatórios por ELISA.A candidata tem desenvolvido diversas das técnicas usadas nos estudos apresentados, e está desenvolvendo bem tanto o manuseio dos animais e seus tratamentos como a coleta dos tecidos e de sangue. Além disso, sabe manipular o sistema de medida de pressão arterial caudal, tanto para adaptação como para as medidas hemodinâmicas. Tem boa prática na perfusão dos camundongos e coleta dos tecidos, processamento, inclusão em parafina e corte dos tecidos em micrótomo. Está auxiliando as pós-graduandas na obtenção de tecidos, preparação de lâminas e na padronização dos métodos de marcação por imunohistoquímica. Necessita desenvolver o método de marcação por imunohistoquímica e aprender os métodos de quantificação por ELISA.