MIOSINA-Va E DLCs COMO ALVOS PARA TERAPIA ANTI-TUMORAL MEDIADA POR shRNA E PEPTIDEOS APOPTOGÊNICOS

• Processo: 09/10582-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Enilza Maria Espreafico
• Beneficiário: Ana Paula Barreto de Paiva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/50167-3 - Miosina-Va e DLCs como alvos para terapia anti-tumoral mediada por shRNA e peptídeos apoptogênicos, AP.R
• Assunto(s): Metástase Melanoma Interferência de RNA Neoplasias Terapia genética Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: apoptose | câncer | melanoma | Metástase | RNAi | terapia genica | Apoptose, migração celular e câncer

Resumo

Um dos mecanismos propostos para modular a função dos fatores pró-apoptóticos Bim e Bmf é o seqüestro no citoesqueleto, promovido pelas cadeias leves DLC1 e DLC2 e os respectivos motores moleculares, dineína e miosina-Va (MVa). Demonstramos, em nosso laboratório, que um fragmento da cauda da MVa (MVaf), capaz de interagir com DLCs 1 e 2, induz intensa apoptose em células tumorais. Por interferir sobre a via intrínseca da apoptose, uma via chave para a supressão tumoral, o peptídeo MVaf oferece a possibilidade de ação específica contra câncer. Sendo assim, o presente projeto tem por objetivos: (1) Avaliar o potencial do MVaf como agente anti-tumoral, através das abordagens de terapia gênica e terapia peptídica in vitro e em modelo animal; (2) Dissecar os mecanismos pelos quais o MVaf desencadeia a resposta apoptótica; e (3) Investigar o envolvimento de MVa e DLCs na promoção de fenótipos malignos, em modelos experimentais de melanoma e carcinoma mamário, buscando definir o potencial do silenciamento dessas moléculas como estratégias anti-tumorais. Interferência funcional e terapia gênica serão realizadas através de vetores lentivirais ou plasmidiais, carregando transgenes, que codificam proteína ou shRNA, sob comando de promotores com atividade constitutiva ou regulada. A terapia peptídica será baseada no MVaf recombinante ou peptídeos sintéticos ligantes de DLCs, associados a um domínio de transdução/penetração celular (CTD/CPP). As análises funcionais incluirão quantificação da resposta apoptótica e avaliação da tumorigenicidade e capacidade metastática em modelo animal. Mecanismos moleculares e temporais da resposta apoptótica serão avaliados por microscopia confocal, citometria de fluxo, imunoprecipitação, pull-down e espectrometria de massa. Com isso, esperamos contribuir para a elucidação de novos mecanismos e desenvolvimento de estratégias terapêuticas dirigidas a vias centrais de controle da morte e invasão celular, com perspectiva de ação específica contra o câncer.