Análise da metilação global e das modificações das histonas durante o desenvolvimento placentário em bovinos

• Processo: 10/01886-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2010
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Flavia Lombardi Lopes
• Beneficiário: Bianca Maria Campanelli Faccio
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/50381-5 - Regulação epigenética do desenvolvimento placentário em bovinos, AP.JP
• Assunto(s): Clonagem Epigenômica Placenta Epigênese genética Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | clonagem | epigenética | placenta | Epigenética

Resumo

Resumo: Para a avaliação dos padrões de metilação global por RLGS e das modificações das histonas, nos diferentes tecidos placentários nas gestações produzidas in vivo, in vitro e por TN, será necessária a produção dos embriões, a coleta e processamento dos materiais. O objetivo deste projeto de treinamento técnico será auxiliar na produção, coleta e processamento das amostras. Para tanto, as amostras serão coletadas em nitrogênio líquido ou paraformaldeído 4% e posteriormente incluídas em resina e serão preparados cortes histológicos, bem como serão extraídos o DNA e RNA.Objetivos: auxiliar na produção, coleta e processamento das amostras placentárias necessárias para as análises de metilação global por RLGS, de modificações das histonas por ChIP e de localização imunohistoquímica a partir de gestações naturais e obtidas por FIV e TN.Plano de Trabalho e Metodologia: O bolsista de Treinamento técnico (TT-3) participará das atividades de produção, coleta e processamento das amostras para RLGS, ChIP e localização imunohistoquímica. Durante a fase de produção dos embriões, o bolsista participará das técnicas de fertilização in vitro e clonagem, auxiliando em todos os passos envolvidos nestas técnicas, descritos no projeto. Seguindo a coleta aos 45 dias de gestação, as amostras serão processadas para imunohistoquímica e serão também iniciados os procedimentos de extração de RNA e DNA utilizando-se os kits Rneasy Protect Mini e Dneasy (qiagen) segundo as instruções do fabricante. A técnica de RLGS exige DNA intacto e de alto peso molecular, e o bolsista será responsável pelo processo de extração descrito na seção materiais e métodos do projeto. O bolsista será também responsável pelos cortes teciduais realizados em micrótomo que serão utilizados para as reações de imunohistoquímica.