Identificação e caracterização funcional de proteínas específicas do complexo U5 snRNP de Typanosoma cruzi

• Processo: 08/06144-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Regina Maria Barretto Cicarelli
• Beneficiário: Giovana Aparecida de Souza Cintra
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/05766-8 - Identificação e caracterização funcional de proteínas específicas do complexo U5 snRNP de Trypanosoma cruzi, AP.R
• Assunto(s): Trypanosomatidae Biologia molecular RNA nuclear pequeno Ribonucleoproteínas nucleares pequenas Trans-splicing
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: snRNA | snRNP | trans-splicing | tripanosomatidae | Biologia Molecular

Resumo

Existem cerca de 16 a 18 milhões de pessoas na América Latina infectadas com Trypanosoma cruzi, o protozoário patogênico causador da doença de Chagas. A terapêutica continua parcialmente ineficaz, apesar dos esforços que vêm sendo desenvolvidos por vários laboratórios e pesquisadores. Alguns fatores importantes no funcionamento das células eucariotas são os pequenos complexos de RNA e proteínas; estas partículas de ribonucleoproteínas (UsnRNPs) exercem um papel essencial no processamento do pré-mRNA, principalmente durante o processo de splicing (corte de íntrons e união de éxons). As UsnRNPs apresentam um core de proteínas comuns associadas entre si e com o próprio snRNA denominadas de proteínas Sm e proteínas específicas de cada snRNP, cuja extremidade 5' é marcada pela presença de um cap de trimetilguanosina (m3G). Embora estejam bem definidas em mamíferos, as snRNPs ainda não estão bem caracterizadas em certos tripanosomatídeos como Trypanosoma cruzi. No intuito de aprender mais sobre os fatores de splicing (principalmente as UsnRNPs) que possam estar envolvidos na reação de trans-splicing em tripanosomatídeos, este trabalho propõe identificar e caracterizar proteínas específicas do complexo de U5 snRNP, utilizando para isto clonagem e expressão de genes relacionados com esta partícula, produção de anticorpos para imuno-localização nas células do parasita, avaliação das possíveis interações entre os membros de U5 snRNP usando pull down in vitro e o papel funcional destas proteínas na reação de trans-splicing utilizando as técnicas knock-down (RNA interference), reação de células permeáveis e de proteção com RNases. (AU)