Controle da atividade de peptidases tiól dependentes por nitrosilação

• Processo: 11/05987-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de Oliveira
• Beneficiário: Marcelo Yudi Icimoto
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Enzimologia Oligopeptidases Peptídeo hidrolases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Nitrosilação | oligopeptidases | Proteases | Enzimologia

Resumo

A nitrosilação de proteínas representa um dos poucos modos de modificação pós-traducional que são reversíveis. No caso particular das enzimas, modulações reversíveis via nitrosilação/denitrosilação são importantes primeiro porque são reações rápidas (ordem de tempo abaixo de milisegundos), permitindo ajustes finos no controle da atividade e segundo porque algumas são peças-chave na regulação de vias de transdução de sinais. O principal objetivo do presente projeto é o estudo do efeito da S-nitrosilação de peptidases em suas atividades enzimáticas. Através de agentes nitrosilantes e doadores de NO SNAP (S-Nitroso-A-acetil-penicilamina, Sigma), SIN-1 (Hidrocloreto de 3-Morfolinosidnonimina, Sigma) e SNOG (S-Nitrosoglutationa, Sigma), largamente utilizados na literatura, realizaremos a nitrosilação in vitro das peptidases tiól dependentes tanto em ensaios cinéticos, com as peptidases recombinantes purificadas, como em ensaios com extratos de células em cultura. Pretendemos então verificar o efeito dessa modificação através de ensaio de atividade comparativos com as mesmas peptidases não nitrosiladas. O efeito da nitrosilação sobre a atividade de cisteíno peptidases tem sido foco de vários estudos; porém não existem estudos mostrando o efeito da nitrosilação sobre serino e metalo peptidases que sabidamente são afetadas por reagentes modificadores de grupos tiól. Além disso, mesmo dentre as cisteíno peptidases o efeito de agentes nitrosilantes e de doadores de NO a literatura é escassa. Portanto, as principais peptidases que inicialmente serão estudadas são a timet oligopeptidase de Rattus norvegicus (TOP, uma metalo peptidase tiól dependente), prolil oligopeptidase de Sus scrofa (POP, serino peptidase tiól dependente) e uma metacaspase de Trypanossoma brucei (TbMCA2, cisteíno peptidase).