Identificar e caracterizar proteínas RNA-ligantes contendo os motifs RNP1 e RNP2 nos terminais pré-sinápticos dos neurônios fotoreceptores de lulas

• Processo: 11/13635-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Roy Edward Larson
• Beneficiário: Diego Torrecillas Paula Lico
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Loligo Biologia celular e molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: hnRNP complex | Loligo | optic lobe | presynaptic terminal | RNP motifs | synaptosome | Biologia Celular e Molecular

Resumo

Resumo No doutorado, identificamos e parcialmente caracterizamos uma proteína RNA-ligante de 65 kDa (p65) nos terminais pré-sinápticos de lulas (Loligo plei, espécie do Atlântico Sul) (Lico et al., 2010). Baseado em sequências obtidas por espectrometria de massas, produzimos dois anticorpos policlonais imunoreativos às sequencias-consenso para os RNA recognition motifs (RRMs, também referido aqui como RNA binding protein domains RBP1 e RBP2). Aplicando estes anticorpos em western blots, verificamos sua marcação do p65 e, em adição, a revelação de 3-4 outros polipeptídeos imunoreativos, possivelmente isoformas e/ou proteínas homólogas também contendo os motifs RBP1 e/ou RBP2, indicando que se trata de um conjunto ou uma família de proteínas. Também, análises in silico partindo das sequências obtidas por espectrometria de massas indicaram que se trata de um subgrupo de ribonucleoproteins chamados hnRNP A/B. Estes dados formam a base do presente projeto.Neste projeto pretendemos clonar, sequenciar e caracterizar o p65 baseado nestas sequências obtidas por espectrometria de massas e análises in silico. Temos evidências que p65 faz parte de um complexo ribonucleoproteico que se encontra na região presináptica de neurônios de lula; portanto pretendemos isolar e caracterizar este complexo a partir de sinaptossomos dos lóbulos óticos de lulas. Uma vez isolado, o complexo será analisado por espectrometria de massa para identificar outros componentes que podem ajudar na caracterização do complexo, na produção de novos anticorpos e sondas moleculares, e na definição de sua função. As outras proteínas deste subgrupo de proteínas RNA ligantes encontradas na região presináptica de neurônios de lula serão também objetos de identificação e caracterização visando esclarecer o papel deste subgrupo na função sináptica.