Mudanças Estruturais em Fitocistatinas Híbridas Analisadas por Ressonância Magnética Nuclear de Alta Resolução.

• Processo: 10/09100-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Claudia Elisabeth Munte
• Beneficiário: Italo Augusto Cavini
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Ressonância magnética nuclear Espectroscopia de ressonância magnética nuclear
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: canacistatina | Espectroscopia de RMN | fitocistatina | inibidor de catepsina B | orizacistatina | Ressonância Magnética Nuclear

Resumo

Cistatinas são inibidoras de cisteíno-proteases. A maioria são inibidores fracos da catepsina humana B, a qual tem sido associada com câncer, doença de Alzheimer e artrite. Partindo-se das sequências de orizacistatina-1 e canacistatina-1 foi recentemente obtido um clone híbrido, o qual apresentou uma propriedade inibitória mais alta contra a catepsina B. O clone apresentou duas mutações pontuais não esperadas e uma deleção N-terminal. A reversão dessas mutações independentemente ou ambas simultaneamente abole a atividade inibitória. Estudos de modelagem molecular por homologia, em conjunto com estudos experimentais das mutantes reversas, revelam uma correlação entre os determinantes moleculares para o aumento da atividade inibitória com um decréscimo da estabilidade na proteína.No presente projeto serão analisadas o clone híbrido e suas mutantes reversas através da técnica de espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear multidimensional de alta resolução. Possíveis mudanças estruturais, em especial a perda de uma estruturação local, poderão ser identificadas através dos espectros 15N-HSQC, e poderão ser correlacionadas com alterações das capacidades inibitórias das diversas amostras.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

VALADARES, NAPOLEAO F.; DE OLIVEIRA-SILVA, RODRIGO; CAVINI, ITALO A.; MARQUES, IVO DE ALMEIDA; PEREIRA, HUMBERTO D'MUNIZ; SOARES-COSTA, ANDREA; HENRIQUE-SILVA, FLAVIO; KALBITZER, HANS R.; MUNTE, CLAUDIA E.; GARRATT, RICHARD C.. X-ray crystallography and NMR studies of domain-swapped canecystatin-1. FEBS Journal, v. 280, n. 4, p. 1028-1038, FEB 2013. (10/09100-0, 08/58316-5)