Envolvimento do complexo RPA e da proteina Orc1/Cdc6 na replicacao dos terminais de cromossomos em Trypanosoma Cruzi

• Processo: 11/16670-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2012
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Raphael Souza Pavani
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Doença de Chagas Telômero Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdc6 | Complexo ORC | Doença de Chagas | Orc1 | Rpa | telômeros | Trypanosoma cruzi | Proteínas Orc1/Cdc6 e RPA nos terminais cromossomicos de Trypanosoma cruzi

Resumo

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, afligindo diversas regiões do mundo, com foco principal na América Latina. Apesar dos avanços, a doença de Chagas ainda causa cerca de 40.000 novas infecções por ano. O estudo da biologia molecular desse parasita poderá facilitar o descobrimento de novas terapias e desenvolvimento de drogas antiparasitárias. Nosso grupo estuda a maquinaria de pré-replicação e replicação em tripanosomas e neste projeto pretendemos estudar o papel de alguns componentes destas maquinarias no complexo telomérico de T. cruzi. O complexo telomérico é formado pela interação de DNA com proteínas, sendo que estas últimas podem também interagir entre si e são responsáveis pela manutenção desses terminais. O complexo ORC é um dos componentes que forma a maquinaria de pré-replicação ao longo do cromossomo, incluindo os terminais teloméricos. A proteína RPA de eucariotos compreende um complexo trimérico subdividido em três subunidades, que cumpre independentemente ou juntamente com outras proteínas, diversas funções vitais para a célula, sendo uma peça fundamental na replicação, além da subunidade 1 auxiliar na manutenção dos telômeros. Em tripanossomatídeos, como em Leishmania, apenas a subunidade 1 da RPA é encontrada ligando DNA telomérico. O complexo ORC em Trypanosoma cruzi é formado apenas pela proteína Orc1/Cdc6 e a proteína RPA ainda não foi caracterizada nesse organismo. Este trabalho tem como objetivo clonar, expressar e caracterizar a RPA, bem como analisar a interação dessa proteína e da Orc1/Cdc6 com os terminais cromossômicos deste parasita através da produção e purificação dessas proteínas recombinantes, ensaios de EMSA, captura de proteínas por afinidade ao DNA telomérico biotinilado e análises por FISH/IF. O gene da Orc1/Cdc6 será nocauteado por RNAi para checar a importância de suas interações.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

PAVANI, Raphael Souza. Caracterização da interação RPA-1-telômero em Trypanosoma cruzi.. 2014. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.