Anticorpos recombinantes (scFv-intimina) como ferramenta na detecção precoce das diarreias causadas por Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e Escherichia coli produtora da toxina de Shiga (STEC).

• Processo: 11/14361-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2012
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Roxane Maria Fontes Piazza
• Beneficiário: Andressa Caravelli
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Testes imunológicos Escherichia coli enteropatogênica Anticorpos de cadeia única Escherichia coli Shiga toxigênica Escherichia coli
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anticorpos recombinantes | Epec | Escherichia coli | scFv-intimina | Stec | Imunodiagnóstico

Resumo

A diarreia é uma das principais causas de mortalidade infantil, ocasionando aproximadamente 2 milhões de mortes a cada ano pelo mundo, principalmente entre crianças de até 5 anos de idade. Dentre estes patógenos, Escherichia coli (E. coli) diarreiogênica é considerada um importante agente etiológico das doenças diarréicas. Um dos principais fatores de virulência envolvido na patogênese de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e de Escherichia coli produtora da toxina de Shiga (STEC) é a intimina, uma proteína de membrana externa que medeia a adesão íntima da bactéria à célula epitelial. A detecção de STEC e EPEC típica ou atípica é de fundamental importância na definição da conduta terapêutica das infecções promovidas por E. coli, que ainda são a principal causa de diarreia aguda em crianças e adultos em muitos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Dessa forma, anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos. A tecnologia do DNA recombinante permite o desenvolvimento de construções que mantenham ou aperfeiçoem as propriedades funcionais de um anticorpo. Atualmente é possível a produção de fragmentos de anticorpos, como proteínas recombinantes, utilizando diferentes sistemas de expressão baseados na estrutura do anticorpo como os fragmentos variáveis em cadeia única (single chain Fragments variable ou scFv). O scFv é o menor fragmento de anticorpo que ainda retém a capacidade de se combinar com o antígeno, são constituídos dos domínios variáveis (V), mas não dos domínios constantes (C) da molécula de anticorpo. Assim, construiremos um gene sintético que por sua vez será clonado no vetor de expressão pAE, transformado com em linhagem de E. coli BL21(DE3)pLys e submetido à indução protéica, com o objetivo de otimizar a expressão dos anticorpos recombinantes anti-intimina obtidos que foi capaz de reconhecer a região conservada de intimina (Int388-667) na forma purificada e a intimina alfa no isolado de EPEC típica. Essa importante ferramenta será utilizada na padronização de um método diagnóstico simples e rápido para detecção de EPEC e STEC.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CARAVELLI, Andressa. Anticorpo recombinante anti-intimina: uma ferramenta para o diagnóstico rápido de Escherichia coli enteropatogênica e de Escherichia coli enterohemorrágica.. 2013. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.