Clonagem, expressão e purificação de BMP-2 recombinante como ferramenta para avaliar o papel do receptor B1 das cininas na diferenciação osteoblástica induzida por BMP-2

• Processo: 12/07666-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: João Bosco Pesquero
• Beneficiário: Marina Rodrigues e Silva
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Osso e ossos Osteogênese Cininas Sistema calicreína-cinina Expressão de proteínas Purificação de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bmp-2 | Cininas | clonagem | expressão | purificação | receptor B1 | Biologia Molecular

Resumo

O tecido ósseo é um tecido dinâmico, constantemente remodelado, que depende de diversos fatores para manutenção do equilíbrio entre formação e reabsorção óssea. Perdas e danos desse tecido constituem um grave problema de saúde pública. Milhões de brasileiros sofrem, atualmente, com problemas relacionados a lesões músculo-esqueléticas. O tecido ósseo é acometido por várias injúrias, entre as quais se destacam doenças congênitas e metabólicas, além de fatores externos, como fraturas. Todos esses comprometimentos despertam grande interesse na busca por um mecanismo capaz de reparar tecido ósseo lesado. Atualmente as técnicas de engenharia de tecido têm sido indicadas em tratamentos de lesões em tecido ósseo, por serem das mais promissoras terapias alternativas para reparo de danos ósseos. Existem vários mediadores envolvidos no processo de diferenciação osteogênica que buscam reparar e formar o tecido ósseo, sendo alguns desses mediadores as proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs). Além desses, alguns sistemas estão sendo relacionados ao processo de diferenciação óssea como é o caso do sistema calicreína-cininas. Esse sistema tem sido relacionado com a destruição da matriz óssea, porém, pouco se sabe até o momento do verdadeiro papel dos diversos componentes do sistema no referido processo patológico. Com a expressão e utilização da BMP-2 recombinante, o presente trabalho busca elucidar o envolvimento do receptor B1 de cininas na indução do processo de diferenciação óssea. Para alcançar esse objetivo, a proteína BMP-2 será clonada a partir de uma estratégia que permite transferência de sequências de DNA heterólogas entre vetores. Esse sistema foi desenvolvido para a expressão da proteína recombinante fusionada a uma cauda de histidina em sua porção N ou C-terminal, capaz de se ligar a colunas de afinidade. A viabilidade funcional da proteína expressa será testada para sua posterior utilização nos ensaios de diferenciação que visam avaliar o papel do receptor B1 de cininas na osteogênese in vitro como perspectiva para futura avaliação in vivo.