Estudo comparativo de técnicas de transformação de Bacillus megaterium por eletroporação e protoplastos visando a produção de proteínas recombinantes

• Processo: 12/21348-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2013
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Rosineide Gomes da Silva Cruz
• Beneficiário: Renata Porto Sampaio
• Instituição Sede: Centro de Ciências Exatas e de Tecnologia (CCET). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Bioquímica Clonagem Proteínas recombinantes Eletroporação Protoplastos Cocos gram-positivos Bacillus megaterium Processos industriais Estudo comparativo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bacillus megaterium | eletroporação | proteína recombinante | Protoplastos | Transformação microbiana | Bioquímica

Resumo

Este projeto de iniciação científica tem como objetivo dar continuidade aos estudos da etapa de transformação de Bacillus megaterium visando à produção da Penicilina G Acilase (PGA) recombinante. A área de Engenharia Bioquímica do Departamento de Engenharia Química da Universidade Federal de São Carlos (DEQ/UFSCar) possui há anos linha de pesquisa voltada para a produção de PGA por Bacillus megaterium, visando tanto ao entendimento do processo como à formação de pessoal qualificado. Os estudos iniciais utilizavam Bacillus megaterium selvagem e após vários anos tendo como objetivo o aumento da expressão de PGA iniciaram os estudos para expressão da enzima por microrganismo recombinante. Um dos maiores obstáculos enfrentados até o momento reside na etapa de transformação do Bacillus megaterium. A transformação bacteriana consiste em inserir um vetor, no caso um plasmídeo (DNA exógeno), numa bactéria conferindo a estas novas características, como por exemplo, resistência a determinado antibiótico e a habilidade de produzir moléculas de interesse comercial. A transformação é considerada além de uma etapa crítica, um evento de importância central no processo de clonagem. Pretende-se com essa proposta de trabalho de iniciação científica dar continuidade aos estudos das técnicas de transformação em B. megaterium, que diferentemente da E. coli é um microrganismo Gram-positivo. Até o presente momento, não se obteve sucesso nas tentativas de eletroporação do microrganismo com os protocolos utilizados. Assim, diante das dificuldades encontradas na transformação de Bacillus megaterium é que se insere este projeto. Espera-se dessa forma avançar nas pesquisas de um importante catalisador para a indústria farmacêutica e capacitar aluno em nível de IC para trabalhos em laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular visando ao enriquecimento e à complementação da sua formação.(AU)