Análise de interferentes na extração, amplificação e detecção de M. tuberculosis por reação de PCR em amostras de líquido pleural, escarro e lavado broncoalveolar

• Processo: 12/24675-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2013
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Leila Antonangelo
• Beneficiário: Lia Junqueira Marçal
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/50842-2 - Analise de interferentes na extracao,amplificacao e deteccao de m.tuberculosis por reacao de pcr em amostras de liquido pleural,escarro e lavado broncoalveolar., AP.R
• Assunto(s): Escarro Tuberculose Patologia clínica Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Escarro | Lavado broncoalveolar | Líquido pleural | M | Pcr | tuberculosis | Patologia Clínica

Resumo

A tuberculose (TB) é uma das infecções mais prevalentes nos países em desevolvimento e ainda representa importante causa de morbidade e mortalidade. Na doença extrapulmonar, a TB pleural é a forma mais comum em adultos. O diagnóstico de TB pulmonar ou pleural se baseia no isolamento e identificação da micobactéria em amostras biológicas de escarro, lavado broncoalveolar ou líquido pleural. Entretanto, embora altamente específica, a cultura dessas amostras apresenta limitada sensibilidade diagnóstica, além do crescimento fastidioso do microorganismo, chegando a retardar o início do tratamento específico em cerca de 45 dias. Neste sentido, um teste capaz de confirmar ou excluir a doença com rapidez, sensibilidade e especificidade satisfatórias seria o teste ideal. Neste contexto, foram desenvolvidos os testes de amplificação de ácidos nucléicos da micobactéria, dentre eles, a reação de polimerase em cadeia (PCR). Em geral, estes testes apresentam boa acurácia, além de possibilitarem diagnóstico mais precoce. Os principais beneficiados com a utilização destes métodos, são os pacientes cujos espécimes respiratórios são BAAR negativos. Os testes moleculares quando utilizados em amostras de líquido pleural (LP), escarro ou lavado broncoalveolar (LBA) apresentam sensibilidades variáveis (11 a 81%). Esta grande variação na sensibilidade é atribuída a inibidores intrínsecos da amostra, como alto teor protéico, presença de hemorragia e debris celulares; à paucibacilaridae e aos métodos de extração e detecção utilizados. Por outro lado, a contaminação da amostra durante as várias etapas da reação representa importante causa de reação falso-positiva. A técnica de PCR em tempo real minimiza o risco de contaminação, sendo altamente específica, embora também apresente sensibilidade variável. Considerando os principais fatores que interferem na sensibilidade dos testes moleculares, este trabalho visa avaliar potenciais variáveis pré-analíticas e analíticas que influenciam a sensibilidade do diagnóstico de TB, através da utilização de dois tipos diferentes de kits de extração do ácido nucléico e três de amplificação e detecção em amostras de escarro, LP e LBA testadas com diluições seriadas e conhecidas da micobactéria.