Avaliação ex-vivo do efeito do beta-ácido do lúpulo (Humulus lupulus) sobre a expressão gênica intestinal de frangos de corte

• Processo: 13/06697-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Zootecnia - Nutrição e Alimentação Animal
• Pesquisador responsável: José Fernando Machado Menten
• Beneficiário: Cristiano Bortoluzzi
• Supervisor: Marcos Horacio Rostagno
• Instituição Sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Purdue University, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 12/09226-9 - Caracterização da microbiota intestinal de frangos de corte suplementados com beta-ácidos do lúpulo., BP.MS
• Assunto(s): Nutrição animal Microbioma gastrointestinal Expressão gênica Frangos de corte
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: aditivos | Beta-acido do lúpulo | expressão gênica | microbiota intestinal | Nutrição de frangos de corte

Resumo

O objetivo do presente trabalho será avaliar a capacidade dos ²-ácidos do lúpulo em modular a expressão de genes relacionados com a resposta inflamatória intestinal, sob condições normais e de desafio bacteriano, estabelecendo a relação microbiota intestinal-hospedeiro-aditivo. A pesquisa será realizada com um modelo ex vivo, que permite um estudo mais detalhado, ou seja, sem a interferência de variáveis que geralmente influem nos estudos de biologia molecular. Para isto, frangos de corte serão alimentados com uma dieta à base de milho e farelo de soja para atendimento das exigências nutricionais. O íleo será coletado (2 cm) e imerso por 30 minutos em uma solução tampão contendo uma mistura de antimicrobianos (penicilina, neomicina e estreptomicina), com o objetivo de eliminar a microbiota presente nas amostras (i.e. contaminantes). Posteriormente, o tecido será lavado com PBS e imerso durante 1 hora em meio de cultura celular (DMEM) de acordo com seguintes tratamentos: T1: controle, apenas DMEM; T2: DMEM com adição de 60 mg l-1 de ²-ácidos do lúpulo; T3: DMEM com adição de 240 mg l-1 de ²-ácidos do lúpulo; T4: DMEM com adição de 240 mg l-1 de ²-ácidos do lúpulo adicionado de bactéria Gram-negativa (Salmonella Typhimurium na concentração de 105 ufc/mL) e T5: DMEM com adição de 240 mg l-1 de ²-ácidos do lúpulo adicionado de bactéria Gram-positiva (Enterococcus faecalis na concentração de 105 ufc/mL). Os tecidos então serão lavados com PBS e armazenados em Qiazol a -80oC para subsequente extração de RNA, síntese de cDNA e análise de expressão dos genes que codificam as citocinas proinflamatórias: IL-1²; IL-6, INF-³, e as citocinas com potencial anti-inflamatório: IL-4 e IL-10 utilizando PCR em tempo-real (qPCR). Os dados de qPCR serão submetidos à análise de variância (ANOVA), e quando significativa será utilizado o teste de Tukey-Kramer (P<0,05) através do programa estatístico SAS, 9.3 (2012). No Brasil não existe metodologia estabelecida para tais análises, justificando o grande interesse na realização deste estágio de pesquisa no exterior, visto que o conhecimento adquirido poderá posteriormente ser utilizado em projetos futuros. (AU)