Desenvolvimento embrionário in vitro e expressão gênica de embriões bovinos produzidos a partir de oócitos cultivados em meio de maturação com plasma rico em fatores plaquetários e macromoléculas

• Processo: 13/07260-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Alicio Martins Júnior
• Beneficiário: Tairini Erica da Cruz
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Assunto(s): Bovinos Oócitos Embriogênese Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovine | embryo quality | gene expression | macromolecules | maturation medium | platelet factors | Produção in vitro de embriões bovinos

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo verificar os efeitos da adição de plasma sanguíneo rico em fatores plaquetários (PRFP) sozinho ou em combinação com SFB ou BSA, ao meio de maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos, avaliando-se o subsequente desenvolvimento embrionário, número total de células (NTC), porcentagem de células vivas/mortas e expressão gênica. Os seguintes experimentos serão realizados: exp. I: grupos PRFP nas concentrações de 5 e 10%, além de dois grupos controles designados como A (meio MIV + 10% de SFB) e B (meio MIV+ 8 mg/mL de BSA); exp. II: grupos PRFP nas concentrações de 5 e 10% suplementados com 10% de SFB, e o grupo com o melhor resultado no exp. I; exp. III: grupos RPFP nas concentrações de 5 e 10% suplementados com 8 mg/mL de BSA, e o grupo com o melhor resultado no exp. II. Os oócitos, obtidos a partir de ovários de vacas sacrificadas em frigorífico, serão selecionados em meio de maturação base (MM-b; TCM 199 com a adição de bicarbonato, piruvato, glutamina e penicilina, acrescido de SFB ou BSA). Grupos de 20 a 25 oócitos/gota serão cultivados em MM-b com FSH e LH (meio MIV). A seleção espermática será realizada em gradiente descontínuo de Percoll, utilizando o meio TALP suplementado com PHE e heparina para fertilização in vitro (FIV). A cultura dos embriões in vitro (CIV) será feita em meio SOF modificado; as etapas MIV, FIV e CIV serão efetuadas em incubadora de CO2 a 5%, em ar, a 38,7º C e alta umidade. O número e a porcentagem de oócitos que clivarem e atingirem os estágios de mórula/blastocisto, blastocisto/blastocisto expandido serão registrados, respectivamente, às 72, 144 e 168 horas pós-inseminação. ANOVA e teste t de Bonferroni serão empregados para análise de diferenças entre os grupos para o desenvolvimento embrionário, NTC e porcentagem de células vivas/mortas. Os dados de expressão gênica serão analisados através do teste de x2. Diferenças de P<0,05 serão consideradas como significativas. (AU)