Estudo da dinâmica quantitativa de transcrição de gene heterólogo em células animais transfectadas para otimização de bioprocesso

• Processo: 13/18792-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carlos Augusto Pereira
• Beneficiário: Alexandre Gonçalves de Rezende
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/08331-0 - Estudo da dinâmica quantitativa de transcrição de gene heterólogo em células animais transfectadas para otimização de bioprocesso, AP.R
• Assunto(s): Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: qPCR | Rvgp | qPCR

Resumo

A RT-PCR quantitativa (qRT-PCR) é uma importante ferramenta de quantificação gênica e poucos trabalhos têm enfocado seu uso para estudo, monitoramento e controle da dinâmica quantitativa de transcrição gênica heteróloga em sistemas eucarioticos usados para produção de proteínas recombinantes. A maioria dos trabalhos nesta área utilizam a qRT-PCR simplesmente como método de detecção indireta da expressão gênica. Pretendemos aqui, ao contrário, utilizar a qRT-PCR como ferramenta de estudo de dinâmica de transcrição gênica para desenvolvimento molecular de bioprocesso objetivando melhor produtividade. Este trabalho visa portanto usar a qRT-PCR para estudo molecular da dinâmica cinética da expressão do RNA mensageiro (mRNA) que codifica a glicoproteína do vírus rábico (RVGP), em sistema de expressão em células de Drosophila melanogaster S2 estavelmente transformadas e em sistema de expressão em células BHK-21, infectadas com Semliki Forest Vírus (SFV) recombinante carregando o gene RVGP. O objetivo geral do projeto é usar qRT-PCR em conjunto com ELISA e citometria de fluxo para: 1. estudar de forma cinética a dinâmica de síntese do mRNA em diversas condições de bioprocesso com células transfectadas ou infectadas buscando otimização da síntese da proteína recombinante em diferentes condições metabólicas, e desenvolvendo parâmetros para um bioprocesso com maior e melhor produção; 2. padronização de metodologia original de titulação de partículas virais recombinantes não infecciosas (rSFV) que são importantes candidatas a vacinas virais.