Estudo funcional e experimental da proteína Mrck-b em adenocarcinomas colorretais metastáticos ou não

• Processo: 13/21232-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2014
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Rafael Malagoli Rocha
• Beneficiário: Julio Cirullo Neto
• Instituição Sede: A C Camargo Cancer Center. Fundação Antonio Prudente (FAP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias colorretais Adenocarcinoma Metástase neoplásica Proteína cdc42 de ligação ao GTP
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adenocarcinoma Colorretal | Cdc42 | Metástase | Mrck-B | Oncologia

Resumo

Introdução: O câncer colorretal (CCR) é uma neoplasia de origem epitelial e abrange tumores de cólon e reto em homens e mulheres. É uma doença tratável e frequentemente curável quando na ausência de extensão para outros órgãos. No entanto, aproximadamente 50% a 60% dos pacientes diagnosticados com CCR irão desenvolver metástases que são mais comumente encontradas em fígado e pulmão. Objetivo: Avaliar a importância das proteínas Mrck-² e Cdc42 no processo de migração celular e formação de metástases em adenocarcinomas colorretais, através de linhagens celulares e modelos experimentais. Métodos: 60 casos de CCR que desenvolveram metástases e 60 casos que não desenvolveram metástase serão selecionados retrospectivamente dos arquivos do departamento de Anatomia Patológica do Hospital A.C. Camargo e seu material parafinado será resgatado para realização da IHQ. IHQ e IFL serão realizados para os marcadores anti-mrck-² e anti-cdc42, as reações serão analisadas de forma automatizada no equipamento confocal. O western-blot será realizado para confirmação mostrando especificidade de todos os anticorpos e quantificar a expressão proteica nas culturas celulares que serão realizadas para avaliar a migração e invasão entre os diferentes grupos de células através das técnicas de ensaio de cicatrização e migração por transwell. O shRNA e um plasmídeo de superexpressão serão usados para silenciar e superexpressar as proteínas em linhagens metastáticas e não e a migração das células será avaliada por ensaios de transwell. Serão selecionados camundongos para a avaliação de metástases com a depleção de Cdc42 e Mrck-². A partir amostras do banco de tumores, serão extraídos RNAs para avaliar a expressão gênica e a análise estatística será realizada em programa Prism 5.2.1 e a significância será considerada quando p<0.01. (AU)