Caracterização funcional de linhagem superexpressora de RPA-1 de Leishmania amazonenses (LaRPA-1)

• Processo: 14/19622-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Gabriel Arantes Galvão Dias dos Santos
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Protozoologia Genética molecular Leishmania mexicana Sobrevivência celular Reparo do DNA Telômero Caracterização Southern blotting Western blotting Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Leishmania amazonensis | Replication protein A | superexpressor | telômeros | Protozoologia Molecular

Resumo

A leishmaniose é uma doença negligenciada que atinge milhões de pessoas no mundo inteiro, inclusive no Brasil. Tal zoonose é causada pelo protozoário Leishmania spp e é de difícil tratamento e controle, haja vista a restrição do tratamento farmacológico, além da resistência dos parasitos e vetores. Conhecer melhor a biologia celular e molecular do microrganismo causador dessa enfermidade é essencial para buscar novas alternativas de tratamento para a doença, visando sua erradicação. Uma possível estratégia é a elucidação de mecanismos envolvidos no metabolismo do DNA e da estrutura telomérica, como por exemplo, o estudo da proteína RPA, sabidamente envolvida nessas duas vias. Em Leishmania, a RPA-1 não aparece interagindo com os telômeros na forma de um trímerocomo na maioria dos eucariotos, o que sugere que a LaRPA-1, proteína alvo deste projeto, tenha características especiais, que estão associadas a viabilidade celular, como auxiliar a regulação da maquinaria de reparo ao DNA, recrutar a telomerase e auxiliar na manutenção dos telômeros. Esse estudo tem como objetivo caracterizar uma linhagem superexpressora de LaRPA-1, através de sua clonagem por diluição seriada e de estudos funcionais in vitro tais como de localização subcelular utilizando imunofluorescência indireta, western blot, southern blot telomérico e elaboração de curvas de crescimentos. Todos estes ensaios serão realizados em paralelo com a linhagem selvagem e com a linhagem transfectada com o vetor de expressão vazio, no intuito de elucidar algumas funções da proteína.