Caracterização do fator de transcrição VOS-1 em resposta a diferentes condições de estresse e sua relação com o acúmulo de glicogênio em Neurospora crassa

• Processo: 14/24627-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2015
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria Celia Bertolini
• Beneficiário: Amanda Ventura Campos Araujo
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Estresse Neurospora crassa Glicogênio Análise de sequência de RNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Glycogen | Neurospora crassa | stress | VOS-1 transcription factor | Bioquímica e Biologia Molecular de Microrganismos

Resumo

O genoma do fungo Neurospora crassa foi sequenciado em 2003 (Galagan et al.), revelando a existência de cerca de 10.000 genes codificadores de proteínas. Análises mais recentes revelaram que apenas 40% dos genes identificados correspondem a proteínas conhecidas (Wang et al., 2011). N. crassa se destaca como organismo modelo em estudos de expressão gênica, desenvolvimento e diferenciação celular, relógio biológico e defesa do genoma (Perkins e Davis, 2000). Após o sequenciamento do genoma, a construção de linhagens mutantes contendo genes individualmente nocauteados foi iniciada e essas coleções se tornaram disponíveis para a comunidade científica. Em nosso laboratório, um screening utilizando linhagens mutantes em fatores de transcrição avaliou o acúmulo de glicogênio tanto após o crescimento na temperatura normal (30ºC) quanto após choque térmico (30ºC’45ºC) e várias linhagens mutantes apresentaram perfil de conteúdo de glicogênio diferente do apresentado pela linhagem selvagem (Gonçalves et al., 2011, Boni et al., em preparação). Portanto, os fatores de transcrição ausentes nas linhagens mutantes foram considerados como proteínas que regulam o metabolismo de glicogênio no fungo. Dentre esses fatores de transcrição identificados, a proteína VOS-1 mostrou regular esse carboidrato de reserva em conídios e durante o crescimento vegetativo (Boni et al., em preparação) e durante o relógio circadiano através do controle da expressão dos genes gsn e gpn (Virgilio et al., em preparação). Ensaios morfológicos e resultados de experimentos de RNA-seq e ChIP-seq mostraram que provavelmente VOS-1 também regula genes envolvidos em resposta a estresse. O presente projeto se propõe a realizar estudos de caracterização do fator de transcrição VOS-1 em diferentes condições de estresse, analisando o crescimento da linhagem mutante e a localização celular da proteína, e também pretende investigar uma provável regulação do metabolismo do glicogênio mediado por VOS-1, nas mesmas condições.