Estudo da modulação de células de papila apical por lipopolissacarídeo e sobrenadante de células necróticas na indução de osteoclastogênese in vitro

• Processo: 16/24808-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Carla Renata Sipert
• Beneficiário: Pamela Rocha Lopes de Almeida
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Osteoclastogênese Imunidade inata Lipopolissacarídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células da papila apical | imunidade inata | Osteoclastogênese | Biologia celular

Resumo

Dentes com rizogênese incompleta acometidos por necrose pulpar apresentam importante comprometimento estrutural com raízes curtas e paredes dentinárias delgadas. Paralelamente, observa-se o desenvolvimento de áreas de reabsorção óssea no periápice destes casos. A literatura científica tem demonstrado mecanismos envolvidos com a produção de matriz mineralizada por células de papila apical, entretanto não existem ainda evidências acerca da capacidade destas células na modulação de eventos relacionados à reabsorção óssea. Sendo assim, este projeto pretende avaliar o potencial de células de papila apical na modulação da osteoclastogênese in vitro. Culturas primárias de células de papila apical (n=3) serão estabelecidas a partir de técnica de explant. As células serão ativadas com 1 µg/mL de lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli ou por sobrenadante de células necróticas (SN) na diluição seriada 1/10 por 24h. Em seguida, serão tripsinizadas e distribuídas em placas de 24 poços. Para o preparo do meio condicionado, células naïve e ativadas serão mantidas com meio de cultura por 5 dias. O sobrenadante será coletado, centrifugado e armazenadas. A quantificação de IL-6, MCP-1, M-CSF, RANKL e OPG nos sobrenadantes das células será feita por ELISA. Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e células CD14+ serão isoladas e cultivadas. Culturas de monócitos serão mantidas em contato com os meios condicionados por células de papila por 21 dias. Os monócitos serão avaliados quanto à imunomarcação e atividade de fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Os dados serão analisados por meio de análise de variância a um critério adotando-se como significativos valores de p < 0,05. (AU)