Caracterização de mutações PHO-constitutivas em Escherichia coli

• Processo: 17/04130-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Beny Spira
• Beneficiário: Cláudia Ramos de Carvalho Pinto
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Escherichia coli Genética bacteriana Microbiologia Regulon Mutação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Genética bacteriana | Microbiologia | Microbiologia

Resumo

O regulon PHO de E. coli é formado por mais de 30 genes, que respondem, conjuntamente, à disponibilidade de ortofosfato (Pi) no meio. O excesso de Pi no periplasma reprime a transcrição dos genes de PHO, ao passo que, em baixas concentrações de Pi no meio, os genes pertencentes ao regulon PHO têm a sua expressão ativada. O controle da transcrição do regulon PHO é realizado pelo sistema de dois componentes PhoB-PhoR e pelo sistema de transporte PstSCAB-PhoU. Outros dois sistemas relacionados à captação de Pi são importantes para este projeto: o transportador de Pi, PitA, o transportador de glicerol-3- fosfato, Ugp e a enzima fosfatase alcalina, que é o repórter utilizado para identificar o nível de ativação do regulon PHO. Mutantes PHO-constitutivos são aqueles que perderam a capacidade de reprimir a transcrição dos genes de PHO na presença de excesso de Pi no meio. Tais mutantes podem ser isolados na presença de glicerol-2- fosfato (G2P) como única fonte de carbono. Todos os mutantes PHO-constitutivos já isolados, contém mutações em um dos cinco genes do operon pstSCAB-phoU ou no gene phoR. A proposta deste projeto é localizar e identificar molecularmente mutantes PHO-constitutivos isolados, no laboratório, em placas de G2P. O gene afetado pela mutação será localizado através de ensaios de complementação in-trans e, em seguida, sequenciado. Além disso, o nível de constitutividade de cada mutante (atividade da fosfatase alcalina) será medido e correlacionado com o gene afetado e com o tipo de mutação, que pode ser um indel, ou substituição (transição ou transversão) e também em relação ao possível efeito polar (polaridade da mutação). O locus e tipo de mutação serão também correlacionados com o dia de surgimento da colônia mutante na placa de seleção. (AU)