Efeito do gene Aire na propriedade quimiotática de células tímicas epiteliais medulares sobre timócitos

• Processo: 18/06460-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior
• Beneficiário: Mayara Cristina Vieira Machado
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Imunogenética Doenças autoimunes Tolerância imunológica Timócitos Quimiocinas Fatores quimiotáticos CRISPR-Cas9 Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células tímicas epiteliais medulares (mTEC) | CRISPR-Cas9 | Ensaio transwell | Gene Aire | microarrays | Timócitos | Imunogenética molecular

Resumo

O gene Autoimmune regulator (Aire) (cromossomo 21q22.3 humano e 10qC1 murino Mus musculus), é um controlador da tolerância imunológica central e do surgimento de doenças autoimunes. A sequência de Aire apresenta ~80% de similaridade homem-camundongo e este gene regula a transcrição de genes de autoantígenos de tecidos periféricos (PTAs do inglês peripheral tissue antigens) em células tímicas epiteliais medulares (mTECs do inglês medularythymic epitelial cells). Esse fenômeno foi denominado de PGE (do inglês promíscuos gene expression.). O significado da PGE é imunológico, ou seja, a representação do próprio no timo que é a base da indução da tolerância imunológica. Para que ocorra a tolerância aos antígenos próprios do organismo, os timócitos (precursores das células T) originários da medula óssea migram para o timo e entram nesse órgão através da junção córtico-medular. Uma vez no interior desse órgão, os timócitos migram sequencialmente e nessa ordem, córtex e depois medula do timo, estabelecendo respectivamente adesão com as células tímicas epiteliais corticais (cTEC-timócito) e com as células mTEC (mTEC-timócito). Essas interações são comumente referidas como cros stalk tímico. Esses eventos de migração e adesão são importantes para ocorrer a seleção positiva (mediada pelas cTECs) e a seleção negativa (mediada pelas mTECs) dos timócitos. A migração dos timócitos no interior do timo é mediada por quimiocinas como CXCL12 (secretada pelas cTECs) e CCL19 e CCL21 (secretadas pelasmTECs). Em nosso laboratório estamos investigando o papel do gene Aire em células mTEC por meio da estratégia de perda de função mediada por mutações induzidas pelo sistema CrisprCas9.Células mTEC Aire mutantes, desregulam um conjunto grande de genes downs tream incluindo aqueles que codificam moléculas de adesão. Neste projeto pretendemos investigar se Aire também controla genes de quimiocinas envolvidas na migração de timócitos em direção àsc élulas mTEC. Para isto, trabalharemos com essas células em cultura, comparando os perfis de expressão transcricional de mTECs Aire selvagens vs Aire mutantes. A validação do efeito funcional de Aire será realizada pelo ensaio de migração timócitos à mTECs (ensaio transwell).