AGK-BRAF no Carcinoma Papilífero da Tiroide Pediátrico: Investigação do mecanismo associado alta taxa de recorrência e análise funcional

• Processo: 18/09911-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2018
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Janete Maria Cerutti
• Beneficiário: Luiza de Mello Oliveira Sisdelli
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 14/06570-6 - Sequenciamento completo do exoma, Paired-end RNA e genoma: novos insights sobre a natureza genética do câncer de tiróide na idade adulta e na faixa etária pediátrica e aplicações na prática clínica, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 18/26395-5 - Análise 3D da fusão AGK-BRAF em cortes histológicos parafinados de carcinomas da tiroide pediátricos e imagem de High-Throughput para analisar o fenótipo de células transformadas com AGK-BRAF, BE.EP.DR
• Assunto(s): Genética do câncer Neoplasias da glândula tireoide
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Agk-Braf | Carcinoma de Tiróide | Carcinoma Pediátrico | Genética do câncer | Câncer de Tiroide

Resumo

No carcinoma papilífero da tiroide (CPT), a mutação BRAF V600E é a alteração genética mais prevalente em adultos (40%). Por outro lado, no CPT pediátrico (d18 anos),a mutação BRAF V600E é rara, sendo que fusões envolvendo BRAF têm sido identificadas tanto em casos expostos à radiação quanto nos esporádicos. Recentemente, nosso grupo identificou a presença do rearranjo AGK-BRAF em 19% (15/80) dos casos de CPT pediátricos predominantemente esporádicos.Além disso, utilizando FISH break apart,identificamos dois casos com quebra no gene BRAFcujo gene de fusão é desconhecido. Diferente da mutação V600E, a fusão AGK-BRAF é raramente identificada em CPT de adultos. Importante, a presença de mutação ou de fusão no gene BRAFsão específicas do CPT, não sendo identificadas em lesões benignas ou outros subtipos de câncer da tiroide e têm sido associadas com um pior prognóstico,tanto na população adulta quanto na pediátrica. Desse modo, o presente trabalho visa aprofundar os conhecimentos sobre a fusão AGK-BRAF, investigando os possíveis mecanismos associados à alta prevalência na população pediátrica. Para avaliar o mecanismo associado à alta prevalência de AGK-BRAF, investigaremos a distância entre os dois genes no núcleo de tecido tiroidiano normal, nas populações adulta e pediátrica, utilizando 3D-FISH. Além disso, a fim de entender o papel da fusão AGK-BRAF na patogênese dos tumores da tiroide, células de tiroide normal serão transfectadas com plasmídeo contendo rearranjo AGK-BRAF, bem como o BRAF-AGK e compararemos com os efeitos causados pelas alterações RET/PTC1, RET/PTC3, ETV6-NTRK3, BRAF V600E e BRAF Wild-type, também identificadas nos tumores da tiroide. Por Western Blot, avaliaremos a ativação da via MAPK e a presença de marcadores de transição epitélio-mesênquima, além dos ensaios de migração e invasão. Assim, os resultados oriundos deste projeto auxiliarão na compreensão dos mecanismos de formação e as consequências decorrentes do rearranjo AGK-BRAF.