Desenvolvimento de um método rápido e sensível para isolar e diagnosticar os microorganismos do sangue humano

• Processo: 18/17611-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Acordo de Cooperação: National Research Council of Canada
• Pesquisador responsável: Daíse Moreno Sás
• Beneficiário: Pedro Henrique Zorzanelli da Vitoria
• CNAE: Testes e análises técnicas ; Pesquisa e desenvolvimento experimental em ciências físicas e naturais ; Atividades profissionais, científicas e técnicas não especificadas anteriormente
• Vinculado ao auxílio: 17/25684-0 - Desenvolvimento de um método rápido e sensível para isolar e diagnosticar os microorganismos do sangue humano, AP.PIPE
• Assunto(s): Biologia molecular Fluxo sanguíneo Técnicas e procedimentos diagnósticos Técnicas de diagnóstico molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: diagnóstico | Doenças Trppicais | Extração DNA de microorganismos | multiplex PCR | Biologia Molecular

Resumo

As infecções de fluxo sangüíneo (BSI) são doenças graves que causam alta morbidade e mortalidade e são um grande problema de saúde pública em todo o mundo. O diagnóstico efetivo dos microrganismos causadores de BSI é o problema mais crítico e mais difícil no tratamento de infecções de sangue. Atualmente, o padrão-ouro para o diagnóstico é cultura de sangue, no entanto, há uma série de desvantagens associadas a este método, incluindo o fato de que é demorado (até 5 dias para os resultados) e tem baixa sensibilidade. Essas questões estão associadas a um atraso na administração do primeiro agente anti-infeccioso adequado, resultando em uma taxa de mortalidade de até 60%. O uso de técnicas de detecção molecular para o diagnóstico de BSI oferece uma série de vantagens em relação ao método tradicional de cultura de sangue. Os métodos moleculares são muito mais rápidos, exigem um menor volume para a coleta de sangue e permitem sensibilidade aumentada. Alguns métodos de diagnóstico BSI baseados em técnicas de detecção molecular, como a PCR, foram desenvolvidos, porém a maioria desses ensaios isolam o modelo de DNA de uma cultura sanguínea positiva, e ainda assim requerem tempo para o crescimento de patógenos. Portanto, técnicas moleculares aplicadas diretamente em amostras de sangue total oferecem a melhor opção para o diagnóstico rápido. Recentemente, alguns métodos foram desenvolvidos que dependem da lise direta do patógeno na amostra de sangue, extração do modelo de DNA, amplificação por PCR e identificação de patógenos. Embora tenha havido algum sucesso limitado com esses métodos, ainda há problemas associados à sensibilidade. Portanto, um método para o diagnóstico rápido e sensível dos microrganismos causadores de BSI ainda é necessário. O passo mais crítico é a purificação de ácidos nucleicos microbianos do sangue. A quantidade de micróbios presentes no sangue durante os BSIs varia de 1 CFU / mL a 1 x 104 UFC / mL; portanto, o método de isolamento de DNA utilizado para o diagnóstico molecular deve ser suficientemente sensível para isolar de baixas quantidades. O diagnóstico rápido e sensível dos agentes patogênicos que causam infecções da corrente sangüínea (BSI) é crítico. Neste projeto, será desenvolvido um novo método para detectar microorganismos no sangue para diagnóstico BSI. Primeiro, um kit sensível será desenvolvido para isolar DNA de todos os microorganismos presentes no sangue. Os painéis serão então feitos para permitir a detecção dos microorganismos mais comuns que causam BSI encontrados no Brasil usando tecnologia de PCR em tempo real, bem como para detectar a resistência a antibióticos.