Cultura primária e caracterização da viabilidade e função esteroidogênica das células do córtex adrenal de cães

• Processo: 18/24250-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária
• Pesquisador responsável: Paula de Carvalho Papa Keohane
• Beneficiário: Cíntia Pinto da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Endocrinologia veterinária Córtex suprarrenal Cultura de células Corticosteroides Cães
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: adrenal cães | cultura celular | função esteroidogênica | viabilidade de cultivo | Endocrinologia

Resumo

Distúrbios na secreção de hormônios produzidos pelo córtex adrenal levam as mais variadas desordens sistêmicas. A mais conhecida delas, o hiperadrenocorticismo (HAC), acomete tanto seres humanos quanto uma parcela significativa de cães. Neste contexto, faz-se necessário um profundo conhecimento da fisiologia adrenal e possíveis interferências na produção de seus hormônios. O presente projeto tem como objetivo estabelecer uma cultura celular primária de células das zonas glomerulosa, fasciculada e reticular oriundas de adrenais de cães. Ao longo de uma semana de cultivo, caracterizar a viabilidade das células e avaliar sua capacidade de preservação da produção esteroidogênica. Além disso, objetivamos avaliar e comparar o efeito dos hormônios insulina, hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) e angiotensina II sob a produção hormonal nos cultivos. Logo depois da coleta das glândulas adrenais, procederemos com a separação das camadas e respectivas zonas da glândula adrenal. Após estabelecimento da viabilidade celular, serão cultivadas 30x103 células/poço em placa de 96 poços e 70x103 células/poço em placa de 24 poços, sendo que metade de cada placa seguirá com dois meios de cultivo diferentes: meio DMEM e DMEM/F12. A técnica de coloração com azul de Trypan será utilizada para a avaliação da viabilidade celular antes do plaqueamento e a cada 48 horas, por um período total de 124 horas. Para avaliação do efeito hormonal sobre a produção esteroidogênica da adrenal, as células serão mantidas em meio de cultivo sem soro fetal bovino overnight e submetidas ao estímulo de 100pM a 1µM de angiotensina II (Sigma-Aldrich, EUA), 10ng/ml a 1mg/ml de insulina (Sigma-Aldrich, EUA) e 1nM a 100nM de ACTH (Sigma-Aldrich, EUA), e avaliadas após 1 hora e 6 horas de tratamento. Os dados obtidos serão avaliados pelo teste paramétrico ANOVA, seguido pelo teste de comparação múltipla de Newman-Keuls, e quando não paramétrico será aplicado o teste de Kruskal Wallis, seguido do teste de comparações múltiplas de Dunn. Esses dados serão analisados através do programa estatístico GraphPad Prism (Software Inc., San Diego, CA, USA), sendo consideradas diferenças estatísticas quando p<0.05.