Indução de mutações no gene Aire por meio do sistema CRISPR-Cas9 em células mTEC 3.10

• Processo: 20/01879-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2020
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior
• Beneficiário: Letícia Agrelli de Brito
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/10780-4 - Efeito de mutações no gene AIRE (síndrome APS1) induzidas por CRISPR-Cas9 na conformação da proteína, no transcriptoma de células mTEC e na sua interação com timócitos, AP.TEM
• Assunto(s): Imunogenética Mutações induzidas Identificação molecular Sequenciamento Genes Timo CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 | Gene Aire | Timo | Imunogenética Molecular

Resumo

A bolsista de IC trabalhará junto aos pós-graduandos e pós-doutorandos do projeto sob a orientação do supervisor. Ela fará uso do sistema CRISPR-Cas9 para induzir mutações no gene Aire, as mesmas associadas com a síndrome APS1 em células mTEC linhagem 3.10. Faremos a seleção das mutações do gene Aire humano (domínios SAND e PHD) para desenhar o RNA guia (gRNA) do sistema CRISPR-Cas9, seguindo as transfecções de células mTEC em cultura e seleção e caracterização dos clones Aire mutantes, separação de células únicas por meio de FACS e identificação molecular de clones mutantes por meio de sequenciamento Sanger.