Treinamento e aperfeiçoamento na execução do preparo e análise ultraestrutural do músculo uretral e reto abdominal de ratas

• Processo: 20/03343-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Fisioterapia e Terapia Ocupacional
• Pesquisador responsável: Angélica Mércia Pascon Barbosa
• Beneficiário: Ana Julia Bimbatti Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/01743-5 - Coorte da tríade gestacional: hiperglicemia, incontinência urinária e perfil clínico, molecular e ômico da miopatia hiperglicêmica na predição de incontinência e disfunção muscular e pesquisa translacional com biodevice para regeneração muscular em ratas, AP.TEM
• Assunto(s): Ratas Diabetes mellitus Uretra Ultraestrutura Doenças musculares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: diabetes | miopatia | ratas | reto abdominal | Ultraestrutura | uretra | materno infantil

Resumo

Treinamento e aperfeiçoamento na execução do preparo e análise ultraestrutural do músculo uretral e reto abdominal de ratasSerá desenvolvido no Laboratório de Pesquisa em Ginecologia, Obstetrícia e Mastologia (LAPGO) da FMB, por graduado na especificidade da área por ser técnica que exige formação e conhecimento básico prévio. As amostras serão obtidas de ratas eutanasiadas, que terão a pele rebatida para expor o 1/3 caudal da linha mediana do abdome, no qual será realizada a dissecação fina do MRA. Em seguida será dissecada a região inguinal, as faces internas e posteriores das coxas e a genitália externa para remoção do tecido conjuntivo fibroadiposo da região ventral, inguinal e perigenital até a face posterior das coxas e posteriormente será realizada a dissecação fina da uretra (ventral) e da vagina (dorsal) em conjunto com remoção do tecido conjuntivo e exposição da túnica muscular superficial desses órgãos e remoção do óstio vaginal. A análise ultraestrutural (fibras musculares e MEC) será realizada utilizando as amostras fixadas e armazenadas por até 24 horas em karnovsky. Para análise o músculo será reduzido às extremidades e seguir-se-á fixação. O material será fixado por 12 horas a 4°C com vermelho de rutênio 0,1%, glutaraldeído 3% em 0,1M de tampão cacodilato (pH 7,4), lavados com tampão cacodilato contendo a mesma concentração do corante (3 x 20 min), em seguida serão fixadas com 1% de tetróxido de ósmio em tampão cacodilato contendo 0,1% de vermelho de rutênio, e lavado com água destilada (3 x 20 min), e posteriormente os blocos serão corados com acetato de uranila a 2% em solução aquosa, por duas horas, desidratado em sequência crescente de soluções de acetona, embebido em mistura de resina (Araldite®) e acetona 100% por 12 horas, embebido em resina na estufa à 37°C, por 1 hora. O material será incluído em resina e a polimerização ocorrerá em estufa à 60°C, por 72 horas, em seguida inclusão do material em araldite, trimagem e seleção de campos desejados, pelos cortes semifinos corados em mistura de azul de metileno 1% e azul II 1% em solução de bórax 1%s. Serão realizados os cortes ultrafinos com o ultramicrótomo Ultratome III 880 da LKB, corados com solução de acetato de uracila em álcool 50% e posteriormente em citrato de chumbo e analisados em microscópio eletrônico de transmissão (Philips CM 100).A solicitação desta bolsa justifica-se por oferecer possibilidade de treinamento técnico e em contrapartida receber colaboração na execução das etapas para análise ultraestrutral do músculo uretral e MRA, o que contribuirá substancialmente para a qualidade dos resultados esperados, além de ser fundamental para o cumprimento dos objetivos propostos no Temático.