Estabelecimento de uma metodologia de edição gênica por CRISPR/Cas9 para a geração de linfócitos T-CAR alogênicos prontos para o uso

• Processo: 20/02043-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2020
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Lucas Eduardo Botelho de Souza
• Beneficiário: Sarah Caroline Gomes de Lima
• Instituição Sede: Hemocentro de Ribeirão Preto. Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP (HCMRP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/08135-2 - CTC - Centro de Terapia Celular, AP.CEPID
• Bolsa(s) vinculada(s): 21/09900-0 - Edição múltipla do genoma baseada em complexos ribonucleoproteicos CRISPR/Cas9 para a geração de células T-CAR alogênicas prontas para o uso, BE.EP.MS
• Assunto(s): Imunoterapia adotiva Hematologia Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Edição de RNA Proteína 9 associada à CRISPR Terapia baseada em transplante de células e tecidos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas9 | Crispr | edição gênica | Linfócitos T-CAR | terapia celular | Hematologia

Resumo

A despeito dos resultados clínicos impressionantes, o acesso ao tratamento com células T-CAR é limitado pelo próprio caráter autólogo desta terapia. Por isso, uma das próximas fronteiras do campo é desenvolver um tratamento utilizando células T-CAR alogênicas prontas para o uso. Estudos iniciais já forneceram a prova de conceito de que esta terapia "universal" é possível por meio da remoção do receptor de células T (TCR) de linfócitos T-CAR utilizando ferramentas de edição gênica. A ausência do TCR impede o desenvolvimento da doença do enxerto versus o hospedeiro, uma complicação frequentemente fatal do transplante alogênico de células imunocompetentes. Além disso, a remoção do antígeno leucocitário humano também ajudaria a reduzir as chances de rejeição das células transplantadas. Portanto, o objetivo deste projeto é estabelecer uma metodologia de produção de células T-CAR anti-CD19 "universais" por meio do nocaute dos genes TRAC (cadeia alfa constante do TCR) e B2M (²2-microgobulina) utilizando edição gênica por CRISPR/Cas9. Para isso, realizaremos a transdução de linfócitos T com o vetor lentiviral codificando CAR anti-CD19 e gRNAs contra os genes selecionados seguida pela eletroporação com mRNA codificante da nuclease Cas9. A alorreatividade das células resultantes será avaliada em ensaios de cocultivo com linfócitos alogênicos e a eficiência terapêutica será interrogada em ensaios de cocultivo com células de linfoma e em modelo murino de linfoma de Burkitt. Este projeto contempla uma das metas do Centro de Terapia Celular (projeto CEPID 013/08135-2). Esperamos que os resultados obtidos permitam o desenvolvimento de uma plataforma de produção de células T-CAR alogênicas prontas para o uso, além do fornecimento do conhecimento necessário para a edição de outros genes visando o aumento da eficiência terapêutica das células T-CAR. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LIMA, S. C. G.; BRAND, H.; BATISTA, L. C.; FANTACINI, D. M. C.; COELHO, M. G. B.; CASTRO, F. A.; COVAS, D. T.; SOUZA, L. E. B.. DEVELOPMENT OF CRISPR/CAS9-BASED GENOME EDITING PLATFORM FOR THE GENERATION OF ALLOGENEIC CAR-T CELLS. CYTOTHERAPY, v. 23, n. 4, p. 1-pg., 2021-04-01. (13/08135-2, 19/18672-1, 19/18702-8, 20/02043-2)

GOMES DE LIMA, SARAH CAROLINE; CARVALHO FANTACINI, DAIANNE MACIELY; BATISTA, LAIS DE CASTRO; SILVEIRA, ROBERTA MARANINCHI; FURTADO, IZADORA PETER; ROSSETTI, RAFAELA; BRAND, HELOISA; COVAS, DIMAS TADEU; BOTELHO DE SOUZA, LUCAS EDUARDO. Strategies to Enhance the Therapeutic Efficacy, Applicability, and Safety of Genetically Engineered Immune Cells. CRITICAL REVIEWS IN IMMUNOLOGY, v. 41, n. 1, p. 27-pg., 2021-01-01. (13/08135-2, 20/02043-2, 19/18702-8, 19/18672-1)

GOMES DE LIMA, SARAH CAROLINE; CARVALHO FANTACINI, DAIANNE MACIELY; BATISTA, LAIS DE CASTRO; SILVEIRA, ROBERTA MARANINCHI; FURTADO, IZADORA PETER; ROSSETTI, RAFAELA; BRAND, HELOISA; COVAS, DIMAS TADEU; BOTELHO DE SOUZA, LUCAS EDUARDO. Strategies to Enhance the Therapeutic Efficacy, Applicability, and Safety of Genetically Engineered Immune Cells. CRITICAL REVIEWS IN IMMUNOLOGY, v. 41, n. 1, SI, p. 41-67, 2021. (20/02043-2, 19/18702-8, 13/08135-2, 19/18672-1)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

LIMA, Sarah Caroline Gomes de. Otimização de uma plataforma baseada na edição gênica por CRISPR/Cas9 para a produção de células T alogênicas expressando o receptor quimérico de antígeno (CAR). 2024. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.