Caracterização estrutural preliminar e triagem de fragmentos para domínios transpeptidase e transglicosilase da proteína PonA1 de micobactérias

• Processo: 20/07197-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2020
• Data de Término da vigência: 24 de janeiro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Marcio Vinicius Bertacine Dias
• Beneficiário: Paula da Silva Canôas
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia estrutural Tuberculose Anti-infecciosos Parede celular Triagem Mycobacterium tuberculosis Etiologia Caracterização estrutural
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Estrutural | desenvolvimento de fármacos baseado em fragmentos | mycobactérias | transpeptidases | desenvolvimento de antimicrobianos

Resumo

Tuberculose (TB), doença infecciosa causada pelo microrganismo Mycobacterium tuberculosis, é a principal causa de morte por um único agente infeccioso no mundo. A dependência de um esquema de administração extenso para a efetividade dos quimioterápicos utilizados atualmente dificulta a adesão ao tratamento, acarretando na emergência de cepas multirresistentes. Isso cria uma necessidade de busca por novos alvos para fármacos avançando no tratamento da doença. A importância da síntese da parede celular na patogênese da doença abre um leque de possíveis alvos, dentre os quais a proteína PonA1, responsável pela síntese de proteoglicanas para a parede celular, se mostrou promissora, pois a depleção do gene ponA1 foi capaz de impedir a disseminação do patógeno em camundongos. Devido à dificuldade em obter a proteína em sua forma solúvel, constatada por estudos anteriores do laboratório, torna-se interessante a determinação da estrutura de proteínas ortólogas, uma vez que estas apresentam sequências conservadas, e consequentemente devem apresentar também uma estrutura similar. Assim, este projeto visa produzir conhecimento acerca da estrutura da proteína PonA1 e seus ortólogos em M. thermoresistibile e M. smegmatis. Para isso, as regiões codificadoras dos genes serão amplificados e clonados em vetores de expressão, que serão introduzidos em células competentes para produção da enzima. A proteína será purificada por afinidade e exclusão molecular e será submetida a testes de cristalização e a triagem de uma biblioteca in house de moléculas. Com esse projeto, esperamos obter importantes resultados que contribuam para o entendimento da estrutura da PonA1 e também na identificação de novos possíveis inibidores.