Atividade transcricional e pós-transcricional de timócitos que aderem a células mTEC mutantes no gene Aire

• Processo: 20/09664-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior
• Beneficiário: Mayara Cristina Vieira Machado
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/10780-4 - Efeito de mutações no gene AIRE (síndrome APS1) induzidas por CRISPR-Cas9 na conformação da proteína, no transcriptoma de células mTEC e na sua interação com timócitos, AP.TEM
• Assunto(s): Imunogenética Transcriptoma Células epiteliais CRISPR-Cas9 Timócitos Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 | Gene Aire | mTECs | Timócitos | Transcriptoma | Imunogenética molecular

Resumo

O (a) bolsista estudará o perfil transcricional envolvendo mRNAs e miRNAs de timócitos que interagem fisicamente com células mTECs Aire wild-type (wt) ou Aire mutantes (adesão mTECs-timócitos em cultura in vitro). Como já discutido no projeto geral, a interação entre timócitos e as células tímicas epiteliais (TECs) é essencial para o desenvolvimento desses dois tipos celulares. Para testar essa hipótese, utilizaremos o sistema modelo de adesão mTECs-timócitos (co-cultura in vitro) para estudarmos seu efeito na modulação da expressão gênica. Como já vimos observando que esse tipo de adesão interfere com o transcriptoma das mTECs (Pezzi et al 2016), aventamos a possibilidade de que isso também poderá influenciar a atividade transcricional dos timócitos. Testaremos se mutações no gene Aire associadas com a síndrome APS1, mas induzidas pelo sistema CRISPR-Cas9 (mutações do gene Aire humano nos domínios SAND e PHD1) em mTECs, poderão influenciar a adesão e consequentemente a atividade transcricional dos timócitos. Uma vez com os dados de expressão provenientes de timócitos que aderiram a células mTEC Aire wt ou Aire mutantes, investigaremos as redes de interação entre essas duas espécies de RNA, ou seja, as interações miRNAs-mRNAs que em última análise controlam a expressão gênica a nível pós-transcricional. Os resultados serão úteis para avaliarmos se há associação entre mutações de Aire em mTECs com a atividade gênica de timócitos que aderem a essas células, o que também é importante para o estabelecimento da tolerância imunológica. (AU)