Adaptação e validação de ensaio imunoenzimático para mensuração das concentrações circulantes de progesterona no início da gestação

• Processo: 20/12207-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2020
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Guilherme Pugliesi
• Beneficiário: Jonatas Maciel Claudio
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 15/10606-9 - Inovações no diagnóstico precoce da gestação em bovinos, AP.JP
• Assunto(s): Prenhez Corpo lúteo Progesterona Imunoensaio Radioimunoensaio Técnicas imunoenzimáticas Sensibilidade e especificidade
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: corpo lúteo | gestação | progesterona | Fisiologia Biotecnologia da Reprodução Animal

Resumo

As concentrações de progesterona circulante servem como indicador da funcionalidade do CL embovinos. Assim, para que se possa confirmar que o CL não esteja funcional através da detecção daluteólise por ultrassonografia Doppler nos estudos anteriores é fundamental que as concentraçõesplasmáticas ou sorológicas estejam <1ng/mL (Pugliesi et al., 2012). Para isso, a maioria dosimunoensaios que apresentam alta sensibilidade e especificidade para mensurar a progesteronausam 125I para marcar a progesterona. Entretanto, a radioatividade destes radioimunoensaios é umrisco para a saúde e para o meio ambiente, além do descarte do lixo radioativo ser oneroso einconveniente. Vários ensaios não-isótopos tem sido reportado para hormônios esteroides masensaios comerciais viáveis e sensíveis não estão disponíveis para mensurar as concentrações deprogesterona em bovinos. Assim, métodos alternativos devem ser desenvolvidos para que se tenhaum método menos prejudicial ao meio ambiente mas também sensível e específico para seu uso empesquisas com bovinos. O ELISA ("Enzime Linked Immuno Sorbent Assay"), também chamadoteste ou ensaio imunoenzimático, consiste num anticorpo conjugado a uma enzima capaz demodificar um cromógeno, através da reação com seu substrato específico, gerando coloraçõesdiferentes de acordo com o cromógeno. Assim, objetiva-se desenvolver um ensaioimonuenzimático para mensuração de progesterona no plasma e soro com alta especificidade esensibilidade. O protocolo de ELISA serávalidado conforme os procedimentos reportados (Al-Dujaili et al., 2009) para atingir a melhorsensibilidade. O ensaio será validado pela análise de soro e plasma coletado sob diversos condiçõesfisiológicas ao longo do ciclo estral bovino e diversas condições experimentais estabelecidas paraaumentar as concentrações circulantes de progesterona. A reação cruzada com diversos metabólitosserá analisado conforme descrito anteriormente (Al-Dujaili et al., 2009), objetivando desenvolverum teste com baixa interferência de outros metabólitos no ensaio. Estudos de acurácia, paralelismoe imprecisão serão conduzidos com base no teste de radioimunoensaio para as mesmas amostras(Fernandes et al., 2011).