Estudo do reparo de quebras dupla-fita do DNA no IL7R e leucemogênese in vivo

• Processo: 20/12780-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: José Andrés Yunes
• Beneficiário: Leonardo Granato Pissinato
• Instituição Sede: Centro Infantil de Investigações Hematológicas Dr Domingos A Boldrini (CIB). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Leucemia Leucemia-linfoma linfoblástico de células precursoras Quebras de DNA Reparo do DNA Receptores de interleucina-7 DNA nucleotidilexotransferase In vivo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crispr | Il7R | in vivo | Lla | reparo de DNA | TdT | Leucemia

Resumo

Aproximadamente 9% das Leucemias Linfoide Aguda pediátrica de células T (LLA-T) apresentam mutação com inserção de resíduo cisteína na porção justamembrana do receptor IL7Ra, que leva à homodimerização e sinalização constitutiva JAK/STAT, contribuindo para a leucemogênese. As mutações concentram-se em um trecho de 26pb do éxon 6 do gene IL7R (hotspot) e são caracterizadas por grandes inserções. O IL7R também se encontra mutado em uma porção dos casos de LLA-B-derivada do subtipo philapdelphia-like. Além disso, recentemente foi descrita uma nova classe de mutações no IL7R, caracterizada pela inserção de aminoácidos positivamente carregados na mesma porção do receptor (+EJM). As mutações +EJM não levam à homodimerização do receptor, porém causam uma hipersensibilização do mesmo, que leva a uma maior sinalização da via JAK/STAT. A análise das mutações sugere que as mesmas têm início por quebras dupla-fita, seguidas de reparo via NHEJ (non-homologous end joining). Resultados prévios mostram que quebras no hotspot do IL7R geradas por CRISPR-Cas9 são suficientes para gerar inserções semelhantes às observadas nos pacientes de LLA-T. Foi observado também que a polimerase TdT (Terminal deoxynucleotidyl Transferase), específica de linfócitos, tem papel importante nessas inserções. Além disso, foram encontrados sítios RSS crípticos, reconhecidos pelas RAGs, na sequência genômica do IL7R, o que pode explicar a origem dessas mutações. A proposta principal deste trabalho é investigar se quebras dupla-fita no hotspot do IL7R de camundongo são suficientes para desenvolver LLA, e também investigar os possíveis papeis da TdT e RAG1/2 nesse processo mutagênico. (AU)