Toxicidade, genotoxicidade e capacidade de adesão de Candida albicans em queratinócitos bucais após protocolos de inativação fotodinâmica mediada pelo Pelargonium sidoides

• Processo: 21/02985-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2021
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Lívia Nordi Dovigo
• Beneficiário: Samuel Santana Malheiros
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Fotoquimioterapia Inativação fotodinâmica Movimento celular Adesão celular Genotoxicidade Candida albicans Pelargonium Queratinócitos Teste de biocompatibilidade Análise de variância
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: adesão celular | Cândida Albicans | fotoquimioterapia | Pelargonium | Teste de Biocompatibilidade | Microbiologia e Biologia celular aplicadas

Resumo

Recentemente, relatórios internacionais demonstram um aumento na incidência de infecções, taxas de mortalidade e resistência antifúngica de Candida albicans. Tratamentos alternativos no combate a esse microrganismo têm sido amplamente estudados, como a inativação fotodinâmica e uso de extratos naturais com propriedades antimicrobianas. O EPs® 7630 é um extrato comercial obtido a partir das raízes de Pelargonium sidoides (P. sidoides), o qual vem mostrando potencial de utilização no combate à bactérias, fungos e vírus de interesse humano. Evidências preliminares obtidas em nosso grupo de pesquisa indicam que o P. sidoides também possui grande potencial como fotossensibilizador na inativação fotodinâmica (IF) de C. albicans. Por essa razão, o objetivo deste estudo é avaliar os parâmetros de citotoxicidade e genotoxicidade do uso do P. sidoides na inativação fotodinâmica e a capacidade desta terapia de influenciar na migração celular, e na adesão de C. albicans à células epiteliais. Trata-se de estudo experimental, realizado em laboratório. Será utilizada uma suspensão fúngica padronizada da cepa ATCC 90028 de C. albicans. Os queratinócitos humanos utilizados neste estudo serão da linhagem HaCaT. Para avaliação de viabilidade celular, os queratinócitos serão expostos ao P. sidoides durante 15 minutos no escuro (tempo de pré-irradiação) seguido de iluminação das amostras por 18 minutos, obtendo uma dose de luz de 50J/cm2 (LED ~450nm). Após os períodos propostos, será adicionado novo meio de cultura contendo a solução de MTT e será feita leitura de absorbância em espectrofotômetro. A genotoxicidade será avaliada pelo ensaio de micronúcleos, no qual as células epiteliais serão tratadas seguindo os mesmos protocolos utilizados no ensaio anterior. As amostras serão analisadas em microscópio de fluorescência, onde o número de células com micronúcleo será estimado. Para avaliar migração celular será utilizado o ensaio de cicatrização in vitro, no qual será confeccionada uma "ferida", seguido de aplicação do extrato sob os mesmos protocolos utilizados nos ensaios anteriores. Imagens serão capturadas usando um microscópio de luz invertido e analisadas no software Image J. A migração será determinada através da avaliação da área da ferida e o percentual de fechamento da ferida (FF%) será calculado. Para o ensaio de adesão celular será realizada uma co-cultura de queratinócitos e células fúngicas previamente tratados seguindo os protocolos de PDI previamente descritos. As amostras serão avaliadas em microscopia de fluorescência, onde serão obtidas fotomicrografias para posterior análise em software ImageJ. A porcentagem de adesão em cada cultura será determinada como a razão entre o número de células aderentes de C. albicans em toda a superfície das monocamadas e o número de células de C. albicans inoculadas. Os experimentos serão realizados em quatro ocasiões distintas com três amostras em cada ocasião. O efeito do grupo experimental sobre as diferentes variáveis de desfecho será investigado por análise descritiva dos dados, seguido de Análise de Variância a um fator, se atendidos os pressupostos de normalidade de homocedasticidade. O nível de significância adotado para as análises será de 5%. (AU)