Modelo retrospectivo para a busca e identificação de genes imprinted ligados ao processo de competência oocitária

• Processo: 21/09536-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 30 de janeiro de 2022
• Data de Término da vigência: 29 de julho de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Flávio Vieira Meirelles
• Beneficiário: Dewison Ricardo Ambrizi
• Supervisor: Lawrence Charles Smith
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Université de Montréal à Saint-Hyacinthe, Canadá
• Vinculado à bolsa: 20/02086-3 - Modelo retrospectivo para a busca e identificação de transcritos ligados ao processo de competência oocitária, BP.MS
• Assunto(s): Bovinos Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bissulfito | bovino | corpúsculo polar | Genes imprinted | Igf2-R | Retrospectivo | Biologia molecular

Resumo

Imediatamente após o nascimento, os mamíferos possuem uma reserva de ovócitos estimada em cerca de 1 milhão de células.No entanto, menos de 1% desse pool se tornará um oócito fertilizável. Parte disso ocorre devido a um naturalprocesso de seleção durante a oogênese. Durante a fase de crescimento do oócito, eles devem passar por um processo dematuração citoplasmática, onde se acumulam proteínas, metabólitos e RNAs essenciais para apoiardesenvolvimento embrionário. Eles também precisam passar pela chamada "maturação nuclear ou epigenética",onde os cromossomos se condensam, segregam e reprogramam / adquirem as marcas epigenéticas. Neste ponto,o DNA do oócito está corretamente marcado com metilação de DNA e modificações de histonas. Um dos maisgenes impressos estudados, o IGF2R, é controlado por elementos sensíveis à metilação da cromatina e éexpresso quando a região ICR (região de controle de impressão) é metilada no alelo materno. Oócitosadquirir metilação de DNA de uma maneira dependente do tamanho. A aquisição acontece como resultado dointerações com o microambiente fornecido pelas células foliculares e seu fluido. A cromatina MIIe o primeiro corpo polar, que contém a contraparte do material genético do oócito e é extrudadoapós o término da 1ª meiose, possuem alta correlação quanto às marcas epigenéticas. Esta observaçãotorna o 1º corpo polar uma amostra não invasiva e ideal para investigar o DNA do oócito semcomprometendo seu material genético. Em um trabalho anterior do nosso grupo, demonstramos que a expressãode IGF2R está correlacionado com o desenvolvimento embrionário. Portanto, hipotetizamos que a metilaçãopadrões do IG2R observados na cromatina do primeiro corpo polar de oócitos secundários bovinos sãocorrelacionada com sua capacidade de desenvolver até o estágio de blastocisto. Com base nisso, ele pode ser usado como um adicionalmarcador para reforçar nosso modelo retrospectivo atual, no qual biópsias citoplasmáticas de oócitos estão sendoanalisado por RNA-seq para identificar transcritos associados à competência do oócito. Para atingir esse objetivo,propomos comparar os padrões de metilação entre o primeiro corpo polar e seus respectivos ovócitose a capacidade do oócito de se desenvolver partenogeneticamente até o estágio de blastocisto in vitro. Por este motivo, nósestão solicitando uma bolsa BEPE para ingressar no laboratório do Dr. Lawrence Smith (especialista em análise de genes de impressão emcélulas bovinas) para a realização deste projeto. Resumidamente, os primeiros corpos polares e seus respectivos oócitos serãotratado com bissulfito e sequenciado para comparar os níveis de metilação na região ICR de IGF2R. Em segundo lugar,os respectivos corpos polares de oócitos que tiveram as biópsias sequenciadas por RNA-Seq (projeto FAPESPatualmente em andamento) também serão tratados com bissulfito para analisar os níveis de metilação na região ICR deIGF2R e correlacioná-lo com sua capacidade de desenvolver até o estágio de blastocisto em vacas