Engenharia da via de N-glicosilação de Aspergillus oryzae

• Processo: 21/10802-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 07 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 06 de fevereiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: André Ricardo de Lima Damasio
• Beneficiário: Jaqueline Aline Gerhardt
• Supervisor: Uffe Hasbro Mortensen
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Technical University of Denmark (DTU), Dinamarca
• Vinculado à bolsa: 18/16437-2 - Decifrando o efeito da deleção da via N-glicosilação na secreção de enzimas de Aspergillus nidulans, BP.DR
• Assunto(s): Produção de enzimas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: A | beta-xylosidase GH3 | fungal engineering | N-glycosylation | oryzae | Produção de enzimas

Resumo

Os fungos filamentosos são capazes de produzir e secretar uma variedade de enzimas. Aspergillus sp. e Trichoderma sp. são as principais fábricas de células fúngicas para a produção de enzimas industriais. Aspergillus oryzae é reconhecido como GRAS (geralmente considerado um organismo seguro) e tem a capacidade de secretar uma grande quantidade de proteínas. Portanto, A. oryzae tem sido usada como uma fábrica de células microbianas de baixo custo para a produção de proteínas recombinantes e tem o potencial de ser projetada para produzir proteínas terapêuticas. No entanto, um gargalo na produção de proteínas humanizadas em A. oryzae é o padrão N-glicano das glicoproteínas, que é significativamente diferente do humano. A N-glicosilação desempenha um papel fundamental na estabilidade, secreção, dobramento e atividade das proteínas e, portanto, pode ser uma barreira para a produção de proteínas. Uma alternativa viável é a remodelação da via de N-glicosilação em fungos filamentosos para que as proteínas recombinantes produzidas neste hospedeiro recebam cadeias de N-glicano semelhantes às encontradas em humanos. O objetivo aqui é projetar cepas de A. oryzae nas quais a maioria das glicoformas parecem ser espécies GlcNAcMan5GlcNAc2, que é a estrutura central para a síntese de glicano híbrido. Para isso, iremos deletar e superexpressar os genes envolvidos na montagem e processamento do N-glicano. Para monitorar as espécies de N-glicano predominantes em A. oryzae, a beta-xilosidase GH3 (AN8401; BxlB) de A. nidulans foi usada como uma proteína recombinante modelo. (AU)