Papel de uma ATPase do tipo P em efluxo de metal em Chromobacterium violaceum

• Processo: 22/05740-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: José Freire da Silva Neto
• Beneficiário: Carolina Panosso Schuindt
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/06894-0 - Fatores de transcrição bacterianos envolvidos em homeostase de metais, estresse oxidativo e virulência: investigando como Chromobacterium violaceum muda do ambiente para o hospedeiro, AP.JP2
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/12144-9 - Papel de ZntA de Chromobacterium violaceum na defesa contra a intoxicação por zinco imposta por Dictyostelium discoideum, BE.EP.IC
• Assunto(s): Chromobacterium violaceum
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ATPase do tipo P | Chromobacterium violaceum | Efluxo de metal | resistência a metais | virulencia bacteriana | Genética molecular de bactérias

Resumo

Os metais de transição são micronutrientes essenciais que atuam como cofatores de muitas proteínas, mas o excesso de metal intracelular causa danos. Em bactérias, a homeostase de metais envolve a ação coordenada de transportadores para captação ou efluxo de acordo com a disponibilidade do metal. Neste trabalho, propomos caracterizar o gene CV1154 que codifica uma possível ATPase do tipo P1B4 em Chromobacterium violaceum, um patógeno ambiental oportunista. Investigaremos se a CV1154 funciona como uma bomba de efluxo específica para ferro ou pode estar envolvida no efluxo de outros metais como zinco e cobre. Iremos gerar uma linhagem mutante sem o gene CV1154 por troca alélica. Esta linhagem será caracterizada para fenótipos de acúmulo intracelular de ferro e suscetibilidade à intoxicação por ferro e estresse oxidativo. A quantidade de ferro do mutante será medida. Testes de virulência serão realizados em Galleria mellonella e/ou camundongos. A expressão de CV1154 será avaliada na presença de ferro, outros metais e oxidantes. Os dados obtidos neste estudo irão revelar se o gene CV1154 atua como uma bomba de efluxo de ferro que contribui para a sobrevivência de C. violaceum sob excesso de ferro, inclusive no hospedeiro.