Quantificação de anticorpos em colunas de afinidade com proteínas A e G: avaliação dos efeitos da viscosidade no desempenho dos métodos analíticos

• Processo: 22/07322-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2024
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Operações Industriais e Equipamentos para Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Igor Tadeu Lazzarotto Bresolin
• Beneficiário: Amanda Calil Barcellos Leite
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas (ICAQF). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Diadema. Diadema , SP, Brasil
• Assunto(s): Anticorpos Purificação de proteínas Precipitação Viscosidade Polietilenoglicóis Métodos de análise
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpos | precipitação | viscosidade | Purificação de proteínas

Resumo

Os anticorpos são biomoléculas fundamentais em pesquisas e estudos, diagnósticos clínicos, devido à sua capacidade em reconhecer e ligar a moléculas presentes em uma mistura complexa. Para a obtenção dessas moléculas é a etapa de purificação dos anticorpos, dentre elas destaca-se a técnica não cromatográfica, precipitação, na qual é baseada no princípio de redução da solubilidade de um soluto em um solvente, influenciado pela adição de algum agente precipitante. Dentre os agentes precipitantes, ressalta-se o polietilenoglicol (PEG), que tem como uma das consequências do seu uso o aumento da viscosidade do meio, o que pode acabar dificultando etapas posteriores de separação. Deste modo, este projeto tem como finalidade o desenvolvimento, a otimização e validação dos métodos analíticos em HPLC após a precipitação de anticorpos com polietilenoglicol analisando os efeitos da viscosidade, também conhecido como "viscous fingering". Para tal, serão utilizados anticorpos monoclonais (mAbs) e policlonais (pAbs) empregando as colunas analíticas POROS A e POROS G. Para cada coluna serão avaliados os parâmetros de robustez, especificidade, precisão, linearidade, acurácia e os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ).(AU)