Obtenção de células de glioblastoma humano LAMP2A nocaute via CRISPR/Cas9

• Processo: 22/12651-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Clarissa Ribeiro Reily Rocha
• Beneficiário: Beatriz Silva de Oliveira
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Autofagia Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Ferroptose Glioblastoma Oncologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Autofagia | Autofagia mediada por chaperona | Crispr | Ferroptose | glioblastoma | Resistência a quimioterápico | Oncologia

Resumo

Glioblastoma é um tipo de câncer extremamente agressivo sendo que pacientes com esse tipo de tumor tem sobrevida média entre 12 e 15 meses. Quase todos os pacientes sucumbem a doença devido a resistência ao quimioterápico. O tratamento quimioterápico padrão é realizado através da administração de temozolomida (TMZ) que é um agente alquilante que induz morte celular pela formação de diversos danos no DNA. Entre os diferentes tipos de lesões provocados por TMZ O6-metilguanina configura-se como a mais tóxica. Esta lesão é reparada pela enzima O6-metilguanina metiltransferase (MGMT) e caso não seja reparada essa lesão pode levar a morte celular via atividade da via de reparo de bases mal pareadas (MMR, do inglês mismatch repair). Como consequência, a expressão de MGMT e atividade de MMR estão fortemente associadas a resistência à TMZ. Entretanto, devido a alta recorrência após tratamento com TMZ mesmo em pacientes que não tem alterações nessas vias, outros processos celulares devem estar envolvidos na resistência à TMZ. Esse projeto de iniciação científica tem como objetivo principal estabelecer, validar e caracterizar linhagem de glioblastoma humano LAMP2A nocaute. Para tanto, iremos utilizar células de glioblastoma humano T98G e estabelecer linhagens nocautes para o gene LAMP2A usando a ferramenta de edição gênica CRISPR/Cas9. Após estabelecimento da linhagem celular iremos avaliar a indução e processamento das lesões de DNA induzidas por TMZ, assim como avaliaremos parada de ciclo celular e taxa de proliferação em comparação com a linhagem controle. Iremos também avaliar indução de morte celular após tratamento com TMZ na linhagem controle e na linhagem LAMP2A nocaute. Iremos então avaliar as respostas celulares nessas linhagens frente ao tratamento com TMZ. Pretendemos com isso avaliar o papel desses dois mecanismos de resistência e a partir desses resultados estabelecer protocolo de combinação terapêutica entre TMZ e inibidores desses vias de resistência.