Avaliação do reparo de DSB por NHEJ em células repórter deficientes em PIMREG

• Processo: 22/12544-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Leticia Fröhlich Archangelo
• Beneficiário: Giovanna Gonçalves de Almeida
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular e molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ddr | Dsb | Nhej | Pimreg | Biologia Celular e Molecular

Resumo

PIMREG (PICALM interacting mitotic regulator) é uma proteína nuclear enriquecida no nucléolo e expressa majoritariamente em órgãos linfóides como o timo e o baço. PIMREG atua como marcador de proliferação e sua expressão varia de acordo com a fase do ciclo celular. Além disso, PIMREG é superexpresso em diversos tipos de câncer, sobretudo em glioblastoma (GBM) e sua expressão elevada está relacionada à progressão tumoral e à pior sobrevida dos pacientes. O tratamento padrão de GBM consiste na ressecção cirúrgica do tumor, seguida de quimioterapia com temozolamida (TMZ), contudo, a resistência ao tratamento é frequentemente observada. Dados recentes do nosso grupo demonstram a participação de PIMREG na sinalização de dano no DNA em linhagens de GBM. A expressão de PIMREG aumentou de forma dependente da dose em células de GBM tratadas com TMZ e esse aumento foi acompanhado pelo aumento da fosforilação da histona H2AX (gH2AX) na serina 139, um marcador de dano no DNA. Em adição, o knockdown de PIMREG aumentou a sensibilidade das células ao tratamento e impediu a fosforilação e ativação de ATM após o tratamento com TMZ (Serafim et al, 2022). Dessa forma, este projeto tem como objetivo investigar se PIMREG tem participação no reparo do DNA por meio da via de NHEJ. Este objetivo será alcançado por meio da indução de quebras de dupla fita (DSBs) no DNA de células repórter para o reparo por NHEJ com ausência (knockout) ou superexpressão de PIMREG. Caso seja observado fenótipo que demonstre comprometimento da via de NHEJ em células PIMREG knockout, será realizado o rescue do fenótipo, por meio da expressão de PIMREG heterólogo nestas linhagens.