Função das nucleases MRE11, DNA2 e EXO1 na ressecção do DNA terminal e o reparo das quebras de dupla fita em Trypanosoma brucei

• Processo: 19/01895-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Vigência (Início): 01 de junho de 2019
• Situação: Interrompido
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Ricardo Obonaga Gómez
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular, AP.CEPID
• Bolsa(s) vinculada(s): 22/16039-2 - Função das nucleases MRE11 e EXO1 e helicase BLM na variação antigenica em Trypanosoma brucei, BE.EP.PD
• Assunto(s): Reparo do DNA Biologia celular Biologia molecular Trypanosoma brucei brucei Instabilidade genômica Reparo de DNA tipo recombinacional
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: instabilidade genômica | reparo do DNA | tripanossomatídeos | Biologia Celular e Molecular

Resumo

As quebras de fita dupla do DNA (DSBs) são uma das formas mais tóxicas do dano no DNA. Estas podem surgir acidentalmente durante o metabolismo normal ou após a exposição a agentes que lesionam o DNA. A falha em repará-los pode resultar em instabilidade genômica, uma característica das células cancerígenas. Nos eucariotos, as DSBs são reparadas por recombinação homóloga (HR) e ligação de extremidades não homóloga (NHEJ). Na HR e ligação das extremidades mediada por microhomologia (MMEJ) (um tipo de NHEJ independente do heterodímero Ku), as cadeias de DNA 5´ das DSBs são degradadas nucleoliticamente através de um processo denominado ressecção. Este processo, que gera DNA de simples fita de extremidades 3´ com diferentes longitudes de homologia, é crítico para a escolha da via de reparo por HR ou MMEJ e sinalização de checkpoint. Na maioria dos eucariotos, o reparo por HR e MMEJ é conservado, incluindo Trypanosoma brucei, o parasita responsável da tripanossomíase humana africana, uma doença que é fatal se não tratada. Neste parasita a ressecção não está definida. Deste modo, nós pretendemos caracterizar a função das principais nucleases na ressecção e reparo das DSBs. Para isto, as nucleases MRE11, DNA2 e Exo1 serão silenciadas em diferentes configurações e tanto a ressecção como o reparo das DSBs geradas pelo tratamento com radiação ionizante ou pela atividade da enzima I-Scel serão avaliadas. Além disto, parâmetros como localização nuclear usando microscopia de fluorescência e ligação a cromatina; longitude e taxa de ressecção usando a análise de molécula única de fitas ressectadas e qPCR e; funções destas nucleases na escolha do reparo (HR ou MMEJ) mediante um sistema reporter, serão avaliadas. Além disto, vamos determinar se existem diferenças na participação destas nucleases na ressecção e reparo de DSBs dependente do ciclo celular. Finalmente, nós vamos caracterizar a função destas nucleases na ressecção de DSBs num locus subtelomérico. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARIN, PAULA ANDREA; OBONAGA, RICARDO; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; LIMA, ANDRE ARRUDA; AVILA, CARLA CRISTI; CESTARI, IGOR; MACHADO, CARLOS RENATO; ELIAS, MARIA CAROLINA. ATR Kinase Is a Crucial Player Mediating the DNA Damage Response in Trypanosoma brucei. FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY, v. 8, p. 18-pg., 2020-12-22. (14/02978-0, 14/24170-5, 14/13375-5, 18/12364-0, 19/01895-8, 16/50050-2, 17/18719-2, 15/10580-0)

MARIN, PAULA ANDREA; OBONAGA, RICARDO; PAVANI, RAPHAEL SOUZA; DA SILVA, MARCELO SANTOS; DE ARAUJO, CHRISTIANE BEZERRA; LIMA, ANDRE ARRUDA; AVILA, CARLA CRISTI; CESTARI, IGOR; MACHADO, CARLOS RENATO; ELIAS, MARIA CAROLINA. ATR Kinase Is a Crucial Player Mediating the DNA Damage Response in Trypanosoma brucei. FRONTIERS IN CELL AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY, v. 8, DEC 22 2020. (17/18719-2, 18/12364-0, 15/10580-0, 14/02978-0, 14/24170-5, 19/01895-8, 16/50050-2, 14/13375-5)