Análise funcional do complexo RPA em Trypanosoma cruzi e seu envolvimento com DNA telomérico

Resumo

A doença de Chagas é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, afligindo diversas regiões do mundo, com foco principal na América Latina. Apesar dos avanços, aproximadamente oito milhões de pessoas estão infectadas com essa enfermidade. O estudo da biologia molecular desse parasita poderá facilitar o descobrimento de novas terapias, bem como auxiliar na compreensão da evolução molecular dos organismos eucariontes. O complexo telomérico, responsável pela integridade e estabilidade genômica, é formado pela interação de DNA com proteínas, que são responsáveis pela manutenção e proteção desses terminais. O complexo RPA de eucariotos compreende um heterotrímero, que cumpre diversas funções vitais para a célula, sendo uma peça fundamental na replicação, reparo, recombinação e inclusive manutenção telomérica. Em mamíferos e leveduras, o complexo RPA está envolvido principalmente com a replicação e reparo nos telômeros. Estudos realizados pelo nosso grupo mostraram que a proteína RPA-1 de T. cruzi interage com os telômeros in vivo, em formas replicativas e não replicativas e mostraram que, diferentemente de outros organismos, esta proteína possui afinidade pela fita rica em G telomérica. Além disso, a análise estrutural da proteína RPA-1 de tripanossomatídeos evidencia diferenças significativas em relação à RPA-1 de eucariotos superiores, como a ausência do domínio 70N que interage com proteínas da maquinaria de reparo. Em Leishmania amazonenis, apenas a subunidade RPA-1 foi encontrada interagindo com os telômeros. A ausência de homólogos de proteínas que interagem com o overhang telomérico em tripanosomas, a interação específica RPA-1-telômero e as peculiaridades estruturais da RPA, levam-nos a hipotetizar que essa proteína cumpre um papel distinto daquele descrito para eucariotos, podendo estar envolvida com a proteção dos telômeros. Este projeto visa compreender a função da RPA-1 nos telômeros através de experimentos de RNAi para silenciamento de RPA-1 e através de ensaio de complementação em leveduras. Visa também iniciar estudos com a proteína RPA-2 para checar a ocorrência de trimerização do complexo RPA no telomero, bem como procurar novas proteínas interatoras deste complexo por ensaios de imunoprecipitação, seguidos de análise por espectrometria de massas. (AU)