Estudo das interações entre a proteína telomérica RPA-1 de Leishmania amazonensis (LaRPA-1) e suas parceiras na presença e ausência de estresse oxidativo

Resumo

Tetômeros são complexos DNA/proteína que protegem as pontas dos cromossomos. A manutenção dos telômeros e a atividade da telomerase dependem de complexos protéicos que se associam com o DNA telomérico. Por exemplo, o complexo CST (CDC13/Stn1/Ten1) interage com a telomerase e com a maquinária de replicação do DNA, controlando a replicação nos terminais de cromossomos. Telômeros de tripanossomatídeos são compostos por repetições (TTAGGG)n, porém poucas proteínas teloméricas específicas a estes organismos foram identificadas. O complexo telomérico melhor caracterizado é o de L. amazonensis, que consiste basicamente das proteínas telomerase, LaRBP38 e LaRPA-1 que interagem com a simples fita rica em G e podem ser homólogas funcionais da CDC13 de levedura e da POT1 de vertebrados. A RPA-1 é um complexo proteico ligante de DNA na forma de simples-fita que desempenha papel importante no metabolismo de DNA, incluindo manutenção de telômeros e reparo de DNA. A hipótese que iremos testar, e que norteia este pedido, baseia-se no fato da LaRPA-1 e proteínas ainda não identificadas, estarem envolvidas na formação do complexo de proteção (capping) e manutenção de telômeros em L. amazonensis. Pretendemos primeiramente confirmar interações in vitro já conhecidas entre LaRPA-1 e outras proteínas previamente caracterizadas em nosso laboratório, isolar novos interatores usando métodos bioquímicos e estudar estas interações in vivo utilizando o sistema de duplo-híbrido. Os testes in vitro serão realizados com extratos de parasitas obtidos em condições normais de cultura e também de parasitas submetidos a estresse oxidativo. Aqui vale lembrar que a exposição de L. amazonensis a concentrações elevadas de oxigênio provocam danos metabólicos irreversíveis que afetam o crescimento, a morfologia e a capacidade de transformação dos parasitas. Como os telômeros são estruturas genômicas muito sensíveis aos danos oxidativos, estudar sua constituição em condições de estresse pode nos auxiliar a isolar novos componentes proteicos que cumpram papel importante na sua proteção ("capping"). (AU)