Ouabaína, angiotensina II e ciclooxigenase-2: interações celulares no controle da fisiopatologia endotelial

• Processo: 22/04201-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2022
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Luciana Venturini Rossoni
• Beneficiário: Henrique Charlanti Reis Assunção
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Angiotensina II Ouabaína Sinalização intracelular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: angiotensina II | Ciclooxigease-2 | Fisiologia endotelial | Ouabaína | sinalização intracelular | Fisiologia Vascular

Resumo

A ouabaína (Oua) é um glicosídeo cardenolídeo, encontrado no reino vegetal e em mamíferos. Além de inibir a atividade da Na+-K+-ATPase (NKA), essa interação é capaz de regular proteínas quinases, por meio de sua atividade signalossome, provocando efeitos celulares como hipertrofia e geração de espécies reativas de oxigênios (ERO). Níveis altos desse glicosídeo estão associados com diversas patologias cardiovasculares. A administração crônica de Oua corrobora para uma ação hipertensiva, juntamente com alterações mecânicas e físicas de vasos, altamente leito-específicos. Se observa nesse modelo que as ações vasculares da Oua interagem ou dependem de angiotensina II (Ang II) ou da ciclooxigenase (COX)-2, ou ambas. Essas interações foram demonstradas também em outros tecidos. Somado a isso, a sinalização intracelular da Oua e da Ang II possuem algumas semelhanças, como a cSRC, o EGFR e ERO. Estudos de Oua em células endoteliais ainda são escassos e o conhecimento de suas interações com Ang II e COX-2 em vasos pode propiciar melhor conhecimento de sua ação. Portanto, o presente projeto visa avaliar a sinalização da Oua em célula endotelial, e possíveis interações com as vias de Ang II e COX-2. Para isso, será realizado uma curva concentração-resposta de Oua em células de endotélio humano, em diferentes tempos, avaliando a fosforilação de cSrc. A partir daí, será avaliado em detalhe a participação da Ang II e COX-2, por meio dos inibidores de enzima conversora de Ang II e COX-2, e do antagonismo do AT1R; será a utilizado em paralelo a técnica de RNA interferente pequeno, para silenciar AT1R, COX-2 e EGFR. Também será utilizada antagonista da via do signalossome. Os aspectos avaliados serão: expressão gênica e proteica das vias envolvidas, por meio das técnicas de qRT-PCR e Western Blot; síntese de NO e ERO, usando sondas fluorescentes; síntese de prostanoides e Ang II, utilizando kits de ELISA; e proliferação celular.