Análise proteômica e lipidômica de vesículas extracelulares de fluido folicular bovino isoladas por diferentes métodos

• Processo: 23/00884-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 26 de junho de 2023
• Data de Término da vigência: 11 de dezembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Juliano Coelho da Silveira
• Beneficiário: Gislaine dos Santos
• Supervisor: W. Andy Tao
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Purdue University, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 21/12560-7 - Vesículas extracelulares pequenas de folículos ovarianos bovinos separadas por diferentes técnicas possuem características e perfil de miRNAs distintos, BP.MS
• Assunto(s): Ciências ômicas Proteômica Lipidômica Vesículas extracelulares Fluido folicular Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: extracellular vesicles | Ciências ômicas

Resumo

As vesículas extracelulares (EVs) são nanopartículas secretadas por diferentes tipos de células nos fluidos corporais e carregam materiais bioativos (lipídios, proteínas, miRNAs) como meio de comunicação intercelular. Estudos recentes demonstraram o papel dos EVs como biomarcadores ou como suplementos ao meio de cultura. No entanto, o desafio é definir um protocolo preciso e confiável para o isolamento de EVs devido à sua alta heterogeneidade e sobreposição de propriedades biofísicas. Assim, levantamos a hipótese de que EVs de fluido folicular bovino (FF) isolados por três diferentes metodologias apresentam subtipos distintos de EVs, bem como teores de lipídios e proteínas. Para isso, os EVs serão isolados por ultracentrifugação (UC), cromatografia de exclusão de tamanho (SEC; Izon Science qEV 35 nm; NZL) ou precipitação (Exoquick-TC, System Biosciences; EUA). Todos os isolamentos serão realizados com 100 µL de FF e finalmente ressuspensos em 300 µL de PBS. A lipidômica e a proteômica serão realizadas por espectrometria de massa na Purdue University (IN, EUA) a fim de determinar o conteúdo dessas EVs. Ao final dos experimentos, esperamos poder prever o impacto de cada método de isolamento de EV em experimentos envolvendo suplementação ou diagnóstico de meios de cultura. Além disso, esperamos ter resultados que mudarão paradigmas relacionados ao impacto dos métodos de isolamento de EVs na recuperação de subtipos de EVs do fluido folicular. (AU)