Análise do papel da enolase e do LABCG1 na virulência de L. (L.) amazonensis usando etiquetas e silenciamento por CRISPR-Cas9

• Processo: 21/08666-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia
• Pesquisador responsável: Beatriz Simonsen Stolf
• Beneficiário: Gustavo Rolim Barbosa
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): CRISPR-Cas9 Fatores de virulência Leishmaniose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ) amazonensis | CRISPR-Cas9 | Enolase | Fatores de virulência | Knockout e Etiquetamento | (L | L | Transportador LABCG1 | Leishmaniose

Resumo

A leishmaniose é um complexo de doenças causadas por parasitos do gênero Leishmania, endêmica em 98 países e responsável por mais de 1 milhão de casos todos os anos. A infecção sintomática se manifesta sob diferentes formas clínicas no homem, que são agrupadas em tegumentares/cutâneas e visceral. O parasita é transmitido ao homem (e outros vertebrados) por insetos vetores, nos quais se mantém na forma promastigota. Nas células fagocíticas do hospedeiro vertebrado a Leishmania se diferencia e se multiplica na forma amastigota (intracelular obrigatória). Trabalhos do nosso grupo demonstraram que parasitas das cepas PH8 e LV79 de Leishmania (L.) amazonensis possuem diferenças na virulência em camundongos e na infectividade in vitro. Promastigotas das duas cepas apresentam diferenças no lipofosfoglicano (LPG) e no proteoma de frações enriquecidas em membrana. As proteínas enolase e LABCG1 são mais abundantes o proteoma da cepa PH8, e acreditamos que podem estar diretamente relacionadas com a maior virulência dessa cepa. Por essa razão, este projeto tem como objetivo avaliar o papel dessas proteínas na infectividade e sobrevivência de L. (L.) amazonensis. Para tal, acompanharemos a abundância e localização das proteínas em LV79 e PH8 pelo método de etiquetamento e criaremos uma linhagem knockout para LABCG1 em PH8 por CRISPR-Cas9. Pretendemos avaliar as proteínas etiquetadas e a linhagem knockout durante a infecção para determinar seus papeis na relação patógeno-hospedeiro.