APLICAÇÃO DE CRISPR/Cas9 EM BCG: Análise comparativa de dois ortólogos de Cas9 para geração de nocautes genéticos

• Processo: 23/05432-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Alex Issamu Kanno
• Beneficiário: Beatriz Squinca D'Anníbale
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Vacina BCG Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Tuberculose Vacinas Biotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bcg | Cas | Crispr | nocaute | Tuberculose | Vacinas | Biotecnologia

Resumo

A vacina BCG, a única disponível na prevenção da tuberculose, foi desenvolvida no início do século XX por Albert Calmette e Camille Guérin. A BCG é uma vacina viva atenuada gerada por sucessivos cultivos da cepa patogênica Mycobacterium bovis. Ela previne a tuberculose de maneira segura e eficaz em crianças, no entanto, a proteção conferida pela vacina em adolescentes e adultos é bastante variável, ficando estes mais propensos ao desenvolvimento da tuberculose pulmonar: a forma mais mortal da doença. Nesse contexto, novas vacinas aprimoradas com base em BCG vêm sendo desenvolvidas, ainda que existam muitas barreiras metodológicas para a livre manipulação do genoma do BCG. Duas das vacinas contra tuberculose mais avançadas em ensaios clínicos requereram vários passos, tecnicamente desafiadores, de forma a alterar o genoma visando a criação da cepa vacinal. O objetivo deste trabalho é explorar a aplicação do sistema CRISPR/Cas9 em BCG de forma a conseguirmos manipular o genoma micobacteriano. Dados anteriores de nosso laboratório demonstraram a possibilidade de gerar nocautes em BCG via CRISPR/Cas9, assim como também foram identificados diversos processos que precisam ser superados. Este projeto visa estudar uma Cas9 alternativa à de Streptococcus pyogenes utilizada anteriormente e avaliar diferentes cenários de forma a otimizar sua atividade em BCG. Se bem-sucedido, o projeto resultará em uma melhor eficiência de CRISPR/Cas em BCG possibilitando a realização de diversos outros estudos que requerem a manipulação genética e, pode avançar um passo no desenvolvimento de novas vacinas para tuberculose.