Geração de linhagens de T. cruzi (cepa Y) nocautes (KO) para IP6K, TERT e IP6K+TERT utilizando a abordagem CRISPR-Cas9

• Processo: 23/09435-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Marcelo Santos da Silva
• Beneficiário: Giovana Zukowski Luduvice
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/10753-2 - Investigação do papel dos pirofosfatos de inositol (PP-IPs) em vias de reparo de DNA e dinâmica dos telômeros utilizando tripanossomatídeos como modelo, AP.JP
• Assunto(s): CRISPR-Cas9 Doença de Chagas Pirofosfatos de inositol Telômero Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 | Doença de Chagas | Metabolismo de DNA | Pirofosfatos de inositol | telômeros | Trypanosoma cruzi | Biologia Molecular de tripanosomatídeos

Resumo

Em eucariotos modelo, pirofosfatos de inositol (PP-IPs) - principalmente IP7 e IP8 - estão envolvidos em uma ampla gama de processos celulares, como regulação do comprimento dos telômeros e recombinação homóloga (HR). No entanto, o mecanismo de ação desses metabólitos ainda não está bem estabelecido. Os principais PP-IPs envolvidos nesses processos são IP7 e IP8, que são sintetizados por vias envolvendo a participação das quinases IP6K e PP-IP5K. Parasitos tripanossomatídeos não possuem genes ortólogos para PPIP5K, ou seja, possivelmente não sintetizam IP8, o que os torna excelentes modelos para o estudo de IP7. Assim, este projeto de iniciação científica consiste em gerar linhagens de T. cruzi (cepa Y) KO para IP6K (IP6K-/- ou IP6K-/+), telomerase (TERT-/-) e double-KO (IP6K-/- + TERT-/-), o que facilitará a investigação subsequente do papel de IP7 nas vias de reparo de DNA e homeostase dos telômeros. Estas linhagens de T. cruzi serão essenciais para responder a questões fundamentais levantadas pelo projeto principal o qual esta bolsa está vinculada.