Resposta global de Chromobacterium violaceum à limitação de metais mediada pela proteína de defesa do hospedeiro calprotectina

• Processo: 23/09116-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: José Freire da Silva Neto
• Beneficiário: Juliano Novak
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/06894-0 - Fatores de transcrição bacterianos envolvidos em homeostase de metais, estresse oxidativo e virulência: investigando como Chromobacterium violaceum muda do ambiente para o hospedeiro, AP.JP2
• Assunto(s): Bactérias Chromobacterium violaceum Regulação da expressão gênica Homeostase Metais Interações hospedeiro-patógeno
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Calprotectina | Chromobacterium violaceum | homeostase de metais | Regulação da expressão gênica | relação patógeno-hospedeiro | virulencia bacteriana | Genética de Bactérias

Resumo

Os metais de transição ferro, zinco e manganês são micronutrientes essenciais à vida. Os hospedeiros vertebrados restringem a biodisponibilidade de metais para limitar o crescimento microbiano, um processo chamado imunidade nutricional. A calprotectina (CP) é uma proteína de defesa do hospedeiro liberada pelos neutrófilos durante a infecção que quela ferro, zinco e manganês. Embora o efeito inibitório da CP no crescimento bacteriano esteja bem documentado, as respostas bacterianas à CP são pouco compreendidas. Neste trabalho, investigaremos a resposta transcricional global do patógeno oportunista Chromobacterium violaceum à CP e caracterizaremos os genes regulados pela CP. Faremos sequenciamento de RNA (RNA-seq) da linhagem selvagem de C. violaceum não tratada ou tratada com CP. Os genes regulados por CP identificados nos dados de RNA-seq serão validados por RT-qPCR, e a expressão de alguns genes selecionados será analisada in vivo por fusões de promotores repórteres de bioluminescência. Selecionaremos genes regulados por CP para posterior caracterização funcional, principalmente aqueles relacionados à alocação intracelular ou tamponamento de zinco. Um dos genes que serão estudados é o CV3067, que codifica uma suposta metalochaperona de zinco. Cepas mutantes nulas serão obtidas por troca alélica e testadas quanto à suscetibilidade à limitação de metais e atenuação de virulência em camundongos selvagem e knockouts para CP. Um novo modelo de infecção em camundongos com C. violaceum injetada por via subcutânea será desenvolvido para avaliar o papel dos genes regulados por CP em abscessos. Nossos dados devem revelar a resposta global de um patógeno bacteriano à CP, ampliando o conhecimento sobre os mecanismos bacterianos para superar a imunidade nutricional do hospedeiro. (AU)