Função da Notch1 no metabolismo celular usando modelos 3D: implicações na esteatose hepática

• Processo: 23/13434-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2024
• Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2025
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: José Rodrigo Pauli
• Beneficiário: Ana Paula Azevêdo Macêdo
• Supervisor: Michele Vacca
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Aplicadas (FCA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Limeira , SP, Brasil
• Local de pesquisa: Roger Williams Institute of Hepatology, Inglaterra
• Vinculado à bolsa: 20/15679-2 - Efeitos do exercício físico resistido sobre a via de sinalização da Notch1 e processo de lipogênese e gliconeogênese em tecido hepático de camundongos obesos, BP.DR
• Assunto(s): Biologia celular e molecular Metabolismo celular Hepatopatia gordurosa não alcoólica Fígado Lipogênese Organoides
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Doença Hepática Gordurosa Não-Alcoólica | fígado | lipogênese | Notch1 | Organóides | Biologia Celular e Molecular

Resumo

Na última década, a epidemiologia da doença hepática esteatótica associada à disfunção metabólica (MASLD) cresceu exponencialmente. As vias de sinalização Notch têm sido implicadas na patogênese desta doença. A via Notch é uma cascata de sinalização intercelular vital em múltiplas funções celulares. no metabolismo, incluindo peso corporal, metabolismo energético, composição lipídica no sangue e expressão gênica relacionada ao metabolismo, foram observados em um modelo de camundongo haplo-deficiente para ativação do ligante Notch DLL1 e inibição de Notcc1. Porém, o efeito da deleção de Notch1 no fígado sobre outros tecidos, como tecido adiposo e muscular, precisa ser avaliado, uma vez que existe interação entre os tecidos, e alterações hepáticas podem impactar diretamente nesses tecidos. Para investigar o efeito da modulação de Notch1 em outros tecidos, os organoides pretendem ser utilizados como ferramenta metodológica devido à versatilidade do modelo citado. Técnicas de cultura de células tridimensionais (3D), facilitadas por uma compreensão mais profunda das condições de cultura de células para órgãos adultos, permitiram a expansão in vitro de tecidos primários de camundongos adultos saudáveis e de tecidos humanos e tecidos afetados por doenças. O principal objetivo deste estudo é investigar os efeitos da inibição da proteína Notch1 no modelo MASDL/MASH 3D in vitro e como o crosstalk com o tecido adiposo pode alterar o processo de lipogênese. Primeiro, isolaremos e cultivaremos células primárias de gordura humana a partir de amostras frescas. Em seguida, otimizaremos as condições de cultura para gerar estruturas organoides. Depois de estabelecermos um modelo 3D de base, introduziremos fatores de estresse para recriar o microambiente MASLD, incluindo excesso de ácidos graxos, colesterol, glicose, insulina e indutores pró-inflamatórios. Avaliaremos seus efeitos na morfologia organoide, acúmulo de lipídios, ativação inflamatória e viabilidade celular. Após o estabelecimento do modelo, será realizada a inibição de Notch1 e analisados os efeitos desta inibição na via de sinalização hepática. Finalmente, caracterizaremos minuciosamente os organoides ao longo do processo usando técnicas como imagens de imunofluorescência, análise de transcrição e perfil metabólico para qualificar os modelos MASLD-HCC e de tecido adiposo. (AU)